في إليسا التجربة ، إضافة عينة ، الحضانة ، اللون غالبا ما يجذب معظم الاهتمام من مجرب ، ولكن على ما يبدو بسيطة " غسل " خطوة غالبا ما تعتبر عملية ميكانيكية و الاحتقار . ومع ذلك ، غسل هو روح الرابط الذي يمر عبر كامل عملية إليسا ، ونوعية مباشرة يحدد دقة وحساسية وموثوقية النتائج . غسل غير لائق بما فيه الكفاية لجعل تصميم التجارب تفشل .

الغرض الأساسي من الغسيل : غرامة زهون إشارة " زبال "

1 - إزالة unconjugates : هذه هي المهمة الأساسية من الغسيل . بعد كل خطوة من الحضانة ( المغلف ، الختم ، الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ، واثنين من الأجسام المضادة ، انزيم كونجوجاتيس ) كمية كبيرة من المواد الحرة ( مثل الأجسام المضادة غير الملزمة ، انزيم العلامات ، عينة من مكونات المصفوفة ، وما إلى ذلك ) لا بد أن تكون موجودة في رد فعل المسام . غسل هو إزالة هذه " التدخل الجزيئات " .
2 - الحد من الضوضاء في الخلفية : المواد الحرة ( وخاصة انزيم العلامات ) التي لم يتم إزالتها بشكل فعال يمكن أن كثف بشكل غير محدد على سطح لوحة المسام أو microporous الجدار . في وقت لاحق في عملية تطوير اللون ، هذه الإنزيمات المتبقية تحفز الركيزة لإنتاج اللون ، وتشكيل خلفية عالية إشارة . خلفية عالية يمكن أن تكون خطيرة " غمرت " إشارات محددة حقا ، مما يؤدي إلى :
* إيجابية كاذبة : عينات سلبية تظهر إشارات إيجابية .
* انخفاض الحساسية : ضعف إشارة إيجابية لا يمكن تمييزها عن خلفية عالية ، مما أدى إلى عدم الكشف .
* تقلبات كبيرة في البيانات : السيرة الذاتية قيمة الزيادات بسبب اختلاف الخلفية بين الثقوب ، والتكرار يصبح أسوأ .
3 - الحد من غير محددة ملزمة : heteroproteins والدهون في العينة قد تكون غير محددة الامتزاز على سطح صلب لا يشغلها مستضد / الأجسام المضادة ( على سبيل المثال ، المسام الجدار ، المنطقة التي لم يتم تغطيتها من قبل كوان مانع التسرب ) . غسل فعالة يمكن إزالة هذه المواد ، والحد من خلفية تدخل غير محددة الامتزاز .
4 - ضمان خصوصية التفاعل : فقط من خلال إزالة المواد غير ذات الصلة التي خلفتها الخطوة السابقة ، يمكننا التأكد من أن الكواشف المضافة في الخطوة التالية ( مثل اثنين من الأجسام المضادة ، انزيم كونجوجاتيس والركيزة ) فقط تتفاعل مع الهدف الصحيح جزيء ، وتجنب التدخل المتبادل .

ثانياً - النتائج الخطيرة المترتبة على سوء الغسيل : أسباب تشويه البيانات

1 . عدم كفاية الغسيل ( الأكثر شيوعا والأكثر ضررا ) :
* خلفية عالية : كمية كبيرة من بقايا unconjugated ، مما أدى إلى لوحة كاملة أو اللون المحلي بعد لون عميق جدا ، وارتفاع قيمة التطوير التنظيمي عموما .
* ارتفاع معدل الإيجابية الكاذبة : عينات سلبية كانت ايجابية بسبب ارتفاع الخلفية .
* منحنى القياسية تشوه : ارتفاع تركيز نقطة التطوير التنظيمي قيمة التشبع ، وانخفاض تركيز نقطة إشارة مغمورة في الخلفية ، تضييق نطاق خطي ، سوء المناسب ( ص ² قيمة منخفضة ) .
* انخفاض ملحوظ في الحساسية : من الصعب الكشف عن عينات إيجابية ضعيفة .
* ضعف التكرار : غسل غير كافية وغالبا ما تكون غير موحدة ، مما يؤدي إلى اختلافات كبيرة بين الثقوب ، السيرة الذاتية قيمة تتجاوز المعايير .
* النفايات الكواشف الثمينة :اضطرت إلى إعادة التجربة لأن النتيجة كانت غير موثوق بها .

2 - الإفراط في غسل ( نادرة نسبيا ولكن أيضا الحذر ) :
* إشارة ضعف : مكثفة جدا أو متكررة جدا الغسيل قد يكون جزئيا مزال مستضد الضد المجمعات التي هي بالفعل ملزمة تحديدا ( وخاصة أضعف النسب ) .
* انخفاض الحساسية : فقدان الإشارة في عينات منخفضة التركيز أكثر وضوحاً .
* انخفاض الدقة : درجة الاستخراج قد تكون غير متجانسة ، مما يؤدي إلى زيادة التباين بين المسام .
* تجفيف لوحة المسام : فترة طويلة جدا من الغسيل أو عدم كفاية غسل السائل المتبقي يؤدي إلى تبخر السائل في المسام ، بحيث المغلفة البروتين أو الأجسام المضادة ملزمة لمسخ تعطيل ، مما يؤثر تأثيرا خطيرا على ردود الفعل اللاحقة .

العوامل الرئيسية التي تؤثر على تأثير الغسيل و النقاط الرئيسية في العملية

1 . غسل أوقات :
* حيوية ! الغالبية العظمى من مجموعات تحدد بوضوح عدد مرات الغسيل المطلوبة في كل خطوة ( عادة 3-5 مرات ، الخطوات الرئيسية مثل انزيم المسمى 2 قد تتطلب 5 أو أكثر بعد الحضانة ) .
* المبدأ : في كل مرة يمكنك غسل فقط إزالة معظم ( ولكن ليس كل ) غير المجمعات . مرات عديدة من خلال غسل " تخفيف تأثير " و " تأثير الاستبدال " أسي للحد من تركيز المخلفات . انخفاض عدد مرات زيادة كبيرة في المخاطر المتبقية .
* العملية : اتبع التعليمات بدقة ، لا تقلل من عدد مرات الغسيل .

2 . نقع وقت :
* بعد كل إضافة محلول ، محلول يجب أن تبقى في حفرة لفترة من الوقت ( عادة 30 ثانية إلى 2 دقيقة ) .
* المبدأ : غمر محلول يحتوي على ما يكفي من الوقت المذاب ، منتشر و يسلب unconjugated وغير محددة الممتزات التي تمتز بالقرب من جدار المسام و موقع ملزم . غسل غير كافية إذا كان الوقت قصير جدا .
* تعليمات التشغيل : استخدام جهاز ضبط الوقت لضمان دقة واتساق الوقت المنقوع في كل مرة . الغمر الوقت يمكن أن تكون مناسبة لفترات طويلة من التجارب أو الخطوات التي تتطلب خلفية غاو .

3 . غسل حجم وشمولية :
* كل غسل يجب التأكد من أن سائل الغسيل يملأ الحفرة بأكملها ( عادة 200-300 ميكرولتر ) ، وضمان أن السائل في اتصال كامل مع جميع الأسطح من جدار الحفرة .
* تفريغ / تفريغ الجافة : إزالة الشامبو هو المفتاح . بات الجافة ( مستحسن ) على ورقة ماصة أو استخدام غسالة شفط قوية لضمان عدم وجود قطرات مرئية المتبقية . بقايا تمييع الكواشف المضافة في الخطوة التالية ، وإدخال المواد المسببة لاضطرابات .
التوصيات التنفيذية :
* غسل اليد : قوة بالتساوي على كومة سميكة من ورق ماص ضرب عدة مرات ، عكس الضرب ، واستبدال منطقة نظيفة امتصاص الماء .
* لوحة آلة الغسيل : المعايرة العادية والصيانة لضمان سلاسة إبرة شفط ، موقف دقيق ، شفط كافية ، لا عبر التلوث . تأكد من أن كل حفرة محلول يحتوي على ما يكفي من ملء و امتص جيدا .

4 . غسل العازلة :
* المكونات : برنامج تلفزيوني أو تريس محلول الملح العازلة عادة ما تحتوي على تركيزات منخفضة من غير أيوني المنظفات ( مثل توين 20 ، 0.05 ٪ - 0.1 في المائة ) .
الدور الوظيفي : الخدمات المساندة
* الأملاح العازلة : الحفاظ على درجة الحموضة المناسبة والقوة الأيونية ، وتثبيت مستضد الضد ملزمة .
* المنظفات : يقلل من التوتر السطحي من السائل ، ويعزز التبلل ، يدمر التفاعل مسعور ، ويساعد على فصل وإزالة الشوائب مثل البروتين والدهون غير محددة الامتزاز . هذا هو العنصر الأساسي في الحد من الخلفية .
* المواد الحافظة : يمنع نمو الكائنات الحية الدقيقة .
التوصيات التنفيذية :
* استخدام مجموعة كاملة أو حسب التعليمات بشكل صحيح الذاتي الاستغناء عن محلول .
* متوفر الآن أو تخزينها على النحو المطلوب ( مثل 4 درجة مئوية ) ، لتجنب التلوث أو الفشل ( وخاصة المنظفات التي تحتوي على البكتيريا التي تنمو بسهولة ) .
* تأكد من أن درجة حرارة الغسل هو على مقربة من درجة حرارة الغرفة أو الحضانة درجة الحرارة ، وتجنب الفرق في درجة الحرارة الناجمة عن تأثير الحمل الحراري السائل في المسام أو فقاعة .

5 . تجنب تجفيف لوحة المسام :
* لا تجف micropores بين خطوات الغسيل و بعد ساعة واحدة من الغسيل قبل إضافة الكاشف إلى الخطوة التالية .
* الضرر : التجفيف يمكن أن تجعل المرحلة الصلبة المغلفة البروتين ملزمة الأجسام المضادة لمسخ تعطيل ، مما يؤدي إلى فقدان إشارة أو غير طبيعي .
* التوصيات التنفيذية :
* السيطرة على وتيرة جيدة من الغسيل ، والانتهاء من جميع عمليات الغسيل في أقرب وقت ممكن بعد إضافة الكاشف إلى الخطوة التالية .
* إذا كانت الخطوة تستغرق وقتا طويلا ، إضافة الكاشف التالي أو إضافة كمية صغيرة من محلول / العازلة تغطية مؤقتة ( تأكد من أن لا تؤثر على رد الفعل التالي ) بعد الانتهاء من غسل مضرب لمدة تصل إلى ساعة .

أفضل الممارسات لتحسين عملية الغسيل

1 . الخوف من تعليمات : تعليمات من عدة متطلبات الغسيل ( مرات ، الوقت ، حجم ) مثل القاعدة الذهبية ، بدقة .
2 . عملية موحدة : إنشاء واستخدام طريقة غسل موحدة ( فاز قوة ، عدد مرات ، ورقة ماصة استبدال التردد ) أو تحسين إجراءات الغسيل . الفرق بين المشغلين هو أيضا مصدر الخطأ .
3 . الانتباه إلى لوحة الغسالة :
* الصيانة الدورية ( تنظيف خطوط الأنابيب والإبر ، والتحقق من غسالات ) .
* معايرة كمية السائل و كفاءة الامتصاص .
* التحقق من بقايا زجاجة محلول قبل تشغيل خط أنابيب دون فقاعات .
* إعدادات البرنامج لمطابقة متطلبات عدة .
4 . غسل السائل الجودة : استخدام الطازجة ، خالية من التلوث ، على استعداد بشكل صحيح غسل السائل . عكر ، عجل ، أو غسل السائل من البكتيريا يجب التخلص منها .
5 . مراقبة البيئة : الحفاظ على عملية تنظيف الجدول ، وتجنب الغبار والألياف الوقوع في حفرة .
6 - رصد النتائج : التركيز على التطوير التنظيمي القيم السلبية ( الخلفية ) و الإيجابية ( إشارة قوة ) . ارتفاع غير طبيعي في الخلفية غالبا ما يكون إشارة تحذير من عدم كفاية الغسيل .

الخلاصة : غسل هو حجر الزاوية في دقة إليسا .

الغسيل ليس " خط التجميع " في اليسا التجربة ، ولكن نقطة مراقبة أساسية لضمان بيانات حقيقية وموثوق بها وقابلة للتكرار . في كل مرة يتم غسلها بشكل فعال ، هو " إزالة الحواجز " إشارات محددة ، و " تمهيد الطريق " انخفاض الخلفية . إهمال أو سوء عملية الغسيل هي واحدة من الأسباب الأكثر شيوعا التي تؤدي إلى نتائج غير مرضية من إليسا .

كل طقم إليسا عن عمق البحث مصممة بشكل صحيح في عملية الغسيل في المواصفات . ونحن نوصي بشدة أن المستخدمين : غسل مثل إضافة عينة ، حاضنة ، نفس القدر من الأهمية التجريبية الرئيسية ، والاستثمار في ما يكفي من الاهتمام وتوحيد العملية . فقط من خلال فهم " وراء الكواليس بطل " غسل يمكن أن تجعل البيانات الخاصة بك من إليسا التجربة واضحة وموثوق بها ، وتوفير أساس متين للبحث العلمي أو التشخيص السريري .

دعونا نبدأ مع التركيز على كل غسل ، وفتح نتائج إليسا دقيقة وموثوق بها ! مرحبا بكم في الاتصال لدينا فريق الدعم الفني في أي وقت إذا كان لديك أي أسئلة حول الغسيل في التجربة الخاصة بك .