اليسا : المقايضة بين الدقة والكفاءة في الكشف عن سلامة الغذاء

في مجال سلامة الأغذية ، وسرعة ودقة تحديد التهديدات الخفية ( مثل المواد المسببة للحساسية ، والسموم ، والكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ، إضافات غير قانونية ، وما إلى ذلك ) هو خط الدفاع الرئيسي لحماية الصحة العامة . انزيم مرتبط المناعي فحص ( ELISA ) ناضجة ، وتستخدم على نطاق واسع immunoanalysis التكنولوجيا تلعب دورا هاما في هذه الحملة الصامتة " الكشفية " . في هذه الورقة ، مبدأ التطبيق ، مزايا وعيوب إليسا في الكشف عن سلامة الأغذية سيتم تحليلها .

المبدأ الأساسي اليسا : دقة " مفتاح القفل " رد فعل مستضد الضد

جوهر اليسا هو استخدام محددة للغاية رد فعل ملزم بين المستضدات ( على سبيل المثال ، الأنثوسيانين ، الأفلاتوكسين ) و الأجسام المضادة المحددة . وتشمل الخطوات الأساسية ما يلي :
1 . طلاء : الأجسام المضادة المعروفة ( أو مستضد ) ثابتة على لوحة microporous الجدار .
2 . إضافة عينة الجمع : إضافة عينات من المواد الغذائية إلى اختبار استخراج . إذا كان الهدف ( مستضد ) موجود في العينة ، وسوف تربط على وجه التحديد إلى الأجسام المضادة على جدران المسام .
3 . غسل : غسل المواد غير الملزمة .
4 - إضافة انزيم المسمى الأجسام المضادة : إضافة الأجسام المضادة الأخرى ( الأجسام المضادة ) التي تربط إلى الهدف ، والتي ترتبط مع انزيم معين ( على سبيل المثال ، هورس راديش پراكسيداز ) .
5 - غسل مرة أخرى : غسل غير ملزمة انزيم علامة اثنين من الأجسام المضادة .
6 . اللون : لون الركيزة إضافة انزيم . انزيم يحفز رد فعل الركيزة ، مما أدى إلى تغيير لون قابل للقياس .
7 . اختبار : قياس كثافة الضوء ( OD ) قيمة كل ثقب باستخدام انزيم المسمى الصك . قيمة التطوير التنظيمي يتناسب طرديا مع تركيز الكائن في العينة ، التحليل الكمي أو النوعي يمكن أن يتحقق من خلال مقارنة مع معيار المنحنى .

الهدف من تطبيق نموذجي إليسا في الكشف عن سلامة الأغذية

* الحساسية الغذائية : الفول السوداني ، المكسرات ، الحليب ، البيض ، فول الصويا ، الغلوتين ( القمح ) ، السمسم ، والأسماك ، والقشريات ، وهلم جرا . إليسا هي واحدة من الطرق القياسية الذهب للكشف عن المواد المسببة للحساسية وتحديد الهوية .
* السموم الفطرية : الأفلاتوكسين ، التقيؤ السموم ، الزيرالينون ، Ochratoxin ، فوماراتوكسين ، الخ . من المهم جدا رصد تلوث الحبوب والأعلاف والمكسرات والتوابل .
* مسببات الأمراض التي تنقلها الأغذية والسموم : السالمونيلا ، الإشريكية القولونية O157 : H7 ، الليستيريا ، المكورات العنقودية الذهبية انتروتوكسين ، وهلم جرا .
* بقايا العقاقير البيطرية : المضادات الحيوية ( مثل السلفوناميدات ، الكلورامفينيكول ، بيتا لاكتام ) ، الهرمونات ، طارد الحشرات ، وهلم جرا .
* متبقيات المبيدات : بعض المبيدات الشائعة الاستخدام ( مثل الفسفور العضوي ) .
* إضافات غير قانونية : مثل الميلامين ( الحليب ) و ( الفلفل الحار المنتجات ) وهلم جرا .

مزايا تقنية إليسا

1 . حساسية عالية : مجموعات إليسا الحديثة عادة ما تكون قادرة على الكشف عن جزء في البليون ( المليون ) أو حتى ( تريليون جزء في المليون ) من الدرجة المستهدفة ( مثل الأفلاتوكسين B1 الكشف عن الحد من أقل من 0.1 جزء في المليون ) لتلبية معظم أنظمة سلامة الأغذية ياو الاحتياجات .
2 . خصوصية قوية : على أساس مستضد الضد المناعي ، مع درجة عالية من التحديد إلى الهدف ، يمكن أن تميز بشكل فعال في بنية مماثلة من التدخل ( وخاصة في تحسين الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عدة ) .
3 - تحليل تدفق عالية : اعتماد معيار 96 حفرة لوحة microporous التصميم ، يمكن الكشف عن عشرات العينات في وقت واحد في تجربة واحدة ، هو مناسبة لأنّ سريعة فحص عينات كبيرة ، ومن الواضح أن تحسين كفاءة المختبرات .
4 - عملية موحدة نسبيا ، بسيطة : ناضجة تجاريا عدة توفر عملية موحدة مفصلة قبل المغلفة لوحة / بريميكس كاشف ، المشغل المتطلبات التقنية هي معتدلة نسبيا ، من السهل أن تكون شعبية في المختبرات التقليدية .
5 - متطلبات المعدات المناسبة : المعدات الأساسية هي انزيم آلة وسم لوحة آلة الغسيل ، بالمقارنة مع hplc-ms / MS / PCR ، وغيرها من المعدات الكبيرة ، وشراء وصيانة منخفضة التكلفة ، أكثر مناسبة لأنّ قاعدة أو ميزانية محدودة للكشف عن المنظمات .
6 . أقصر وقت الاختبار : بالمقارنة مع التقليدية أو طريقة زراعة أداة معقدة ، إليسا عادة ما تكون قادرة على الانتهاء من تحليل مجموعة من العينات في غضون 1-4 ساعات ( اعتمادا على مجموعات محددة ) ، وتوفير الإنذار المبكر السريع .
7 - إعداد عينة بسيطة نسبيا : في معظم المواد الغذائية ركائز ، إليسا طريقة المعالجة ( استخراج ، تخفيف ) هو عادة أكثر ملاءمة من أداة التحليل .

القيود المفروضة على إليسا

1 . المحتملة الإيجابية الكاذبة / السلبية الكاذبة :
* مصفوفة التدخل : المكونات الغذائية المعقدة ( مثل أصباغ ، والدهون ، البوليفينول ، والبروتينات الأخرى ) قد ربط الأجسام المضادة غير محددة أو تؤثر على ردود الفعل الأنزيمية ، مما يؤدي إلى إيجابية كاذبة ( خلفية عالية جدا ) أو سلبية كاذبة ( تثبيط ردود الفعل ) .
* عبر ردود الفعل : الأجسام المضادة قد تتفاعل مع الأجسام غير المستهدفة مع هياكل مماثلة ، مما يؤدي إلى إيجابية كاذبة .
* فقدان المعالجة : لا يمكن استخراج كوان كاملة أو كائن تتحلل أثناء عملية الاستخراج ، مما قد يؤدي إلى سلبية كاذبة .
2 - الدقة الكمية محدودة نسبيا : منحنى القياسية مجموعة من اليسا عادة ما تكون في حدود 2-3 أوامر من الحجم ، وعادة ما تكون أقل دقة من hplc-ms / MS ) . النتائج كانت عرضة للتأثير على تفاصيل التشغيل ( عينة الدقة الحضانة الوقت / درجة الحرارة ، تأثير الغسيل ) .
3 - عملية متعددة الخطوات ، هناك خطر من الخطأ : على الرغم من أن التوحيد ، ولكن ينطوي على عدة خطوات إضافة السائل ، الحضانة ، والغسيل ، دليل عملية الخطأ ( مثل إضافة عينات غير دقيقة ، والغسيل غير كافية / الإفراط في ) قد تؤثر على نتائج التكاثر . يمكن تحسين معدات التشغيل الآلي ( مثل جهاز المناعة انزيم الآلي بالكامل ) ولكن زيادة التكاليف .
4 - تطوير أساليب تستغرق وقتا طويلا وتعتمد على الأجسام المضادة عالية الجودة : تطوير جديد وموثوق بها طريقة إليسا ( وخاصة الهدف الجديد ) يتطلب فحص وإعداد الأجسام المضادة عالية الدقة ، تقارب عالية ( عادة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ) ، عملية معقدة ، دورة طويلة ، وارتفاع التكلفة . نوعية الأجسام المضادة هي العامل الحاسم في أداء إليسا .
5 - الكشف عن هدف واحد : واحد فقط يمكن الكشف عن رد فعل انزيم مرتبط المناعي ( ELISA ) عادة واحد أو مجموعة من الأهداف ذات الصلة . اختراع لديها مزايا انخفاض الكفاءة ( تعدد مجموعات أو تعدد الثقوب لوحة ) عند الحاجة إلى فحص بقايا متعددة في وقت واحد .
6 . لا يمكن أن توفر المعلومات الهيكلية : اليسا فقط عن المبلغ الإجمالي من الاستجابة المناعية ، لا يمكن التمييز بين مختلف نظائرها الهيكلية أو الأيضات ( على سبيل المثال ، الأفلاتوكسين B1 و G1 ) من الهدف ، الذي هو أقل شأنا من مطياف الكتلة .
7 - حساسية بعض المواد المستهدفة قد لا تكون كافية : حساسية اليسا قد لا تصل إلى مستوى المتطلبات التنظيمية منخفضة جدا ( على سبيل المثال ، جزء لكل تريليون ) أو تتبع بعض الملوثات الجديدة .

الخلاصة : احتمال أول أداة الفحص الدقيق

إليسا أصبحت أداة فحص موحدة في مجال سلامة الأغذية بسبب حساسية عالية وخصوصية عالية ، وارتفاع تدفق ، عملية بسيطة نسبيا ، وارتفاع فعالية التكلفة . انها تلعب دورا رئيسيا في رصد المواد المسببة للحساسية ، والكشف عن السموم ، ومسببات الأمراض فحص روتيني تحليل بقايا .

ومع ذلك ، فإن المخاطر المحتملة من نتائج كاذبة ، والحد من دقة القياس الكمي ، هدف واحد طريقة الكشف والاعتماد على الأجسام المضادة عالية الجودة لا يمكن تجاهلها . ولذلك ، في ممارسة اختبار سلامة الأغذية :

* اليسا هو عادة أول طريقة الفحص السريع للأشعة السينية ، وتستخدم في الفرز الأولي من عينة كبيرة الحجم .
* في الحالات التي تكون فيها نتائج الفحص إيجابية أو التي تتطلب تأكيدا ، كميا دقيقا ، متعددة تحليل بقايا أو تحديد هيكل ، أكثر تقدما من أساليب التحقق ( على سبيل المثال ، ش مرض التصلب العصبي المتعدد / مرض التصلب العصبي المتعدد ، القيادة العامة ، أو بكر ) عادة ما تكون مطلوبة .
* رقابة صارمة على الجودة ( QC ) والتحقق هي حجر الزاوية لضمان موثوقية نتائج إليسا .

مع تطور التكنولوجيا الحيوية ، مثل الأجسام المضادة المؤتلف التكنولوجيا ، المواد النانوية إشارة التضخيم ، متعدد القنوات الكشف ( multielisa ) وأكثر ذكاء معدات التشغيل الآلي ، إليسا التكنولوجيا باستمرار التغلب على بعض القيود ، وتحسين الكشف عن الأداء ، التمويه ، ونطاق التطبيق ، ومواصلة تعزيز دورها الهام في نظام ضمان سلامة الأغذية . اختيار اليسا أو غيرها من التقنيات يعتمد في نهاية المطاف على متطلبات محددة للكشف عن خصائص الكائن ، والمتطلبات التنظيمية ، مختبر الموارد .

اختيار اليسا هو اختيار نقطة توازن قوية بين الكفاءة والدقة في الكشف عن سلامة الأغذية .

شنغهاي keborui التكنولوجيا الحيوية المحدودة ، المحدودة البحوث المستقلة والتطوير والإنتاج والمبيعات من عدة إليسا ، مع عدد كبير من المؤشرات ، الأنواع كاملة ، وتوفير وقفة واحدة الخدمات التجريبية ، ما قبل البيع وما بعد البيع استجابة سريعة !