أسباب ارتفاع قيمة العينة في اليسا و الحلول

إليسا ( أليسا ) وقد استخدم على نطاق واسع في اختبار المناعية بسبب حساسية عالية وخصوصية . ومع ذلك ، عندما اكتشف الباحثون أن قيمة العينة الامتصاصية عالية بشكل غير طبيعي ، فإنها غالبا ما تكون في حيرة . هذا ليس فقط قد يخفي حقيقة الإشارات البيولوجية ، ولكن أيضا قد يؤدي إلى نتائج خاطئة . كفريق من الخدمات التقنية في هذا المجال ، ونحن سوف نحلل أسباب ارتفاع قيمة العينة ، تساعدك على تحديد مصدر المشكلة بدقة .

عينة من العوامل الذاتية : إشارات غير طبيعية في الكائنات الحية

1 . تركيز العينة خارج نطاق الاختبار :
السبب : الهدف من البروتين / مستضد تركيزات عالية جدا ، تتجاوز أعلى نقطة من المنحنى القياسي ( هوك تأثير / ) .
الظاهرة : ارتفاع تركيز العينة إشارة بدلا من الانخفاض ( سلبية كاذبة ) ، ولكن أكثر من عرض غير طبيعي عالية القيمة .
الحل : إعادة اختبار العينة بعد التدرج تمييع ، ومراقبة ما إذا كانت إشارة يتناقص مع تخفيف نسبة ويدخل في نطاق منحنى القياسية .

2 . عينة مصفوفة التدخل :
السبب : الهيموغلوبين ( انحلال الدم ) ، الدهون ( الدهون في الدم ) ، البيليروبين ( اليرقان ) ، heterophil الأجسام المضادة ، عامل الروماتويد ، وارتفاع تركيز البروتين الكلي أو المخدرات الأيضات في مصل الدم / البلازما .
تدخل الآلية : غير محددة ملزمة ، تؤثر على نشاط انزيم ، وتنتج إشارة الخلفية .
حلول
إعادة جمع عينات المؤهلين ( تجنب انحلال الدم ، الدهون في الدم ) .
العينة يجب أن تعامل بشكل صحيح ( على سبيل المثال ، تمييع ، الطرد المركزي إزالة الشحوم ، خاصة الممتزات ) .
اختيار الأمثل عدة ( على سبيل المثال ، إضافة حاصرات المصفوفة الخاصة ) .

3 - سوء معالجة العينات :
السبب : تكرار تجميد والذوبان يؤدي إلى تراكم البروتين أو التدهور . الحفاظ على درجة الحرارة غير لائق . خطأ في استخدام مضادات التخثر ( على سبيل المثال ، يدتا يؤثر على الكالسيوم التي تعتمد على نظام إليسا ) ؛ عينة مختلطة مع الشوائب .
الحل : التقيد الصارم جمع العينات ، وتجهيز وحفظ إجراءات التشغيل ؛ تجنب تكرار التجميد والذوبان . التحقق من التوافق مع مضادات التخثر .

الكواشف ونظم التفاعل : المتغيرات الخفية في التجارب

1 . الكواشف المشكلة :
السبب : تركيز الأجسام المضادة انزيم المسمى عالية جدا أو إعداد خاطئ . تلوث الركيزة الحل ، خطأ في إعداد أو الحضانة طويلة جدا . معيار / مراقبة الجودة حل أو تخفيف الخطأ ؛ مزيج من دفعات مختلفة من الكواشف .
الحل : التحقق بعناية من خطوات إعداد كاشف . ضمان استخدام نفس الدفعة من الكواشف . استبدال دفعات جديدة أو تركيبات جديدة من أجل إعادة الاختبار .

2 . هوك تأثير :
السبب : في طريقة ساندويتش مزدوجة الأجسام المضادة ، عندما يكون تركيز مستضد عينة عالية جدا ، والإفراط في مستضد في وقت واحد تشبع التقاط الأجسام المضادة للكشف عن الأجسام المضادة ، مما يعوق تشكيل ساندويتش مجمع التقاط الأجسام المضادة للكشف عن الأجسام المضادة ، مما يؤدي إلى انخفاض في إشارة . ومع ذلك ، في الاختبار الفعلي ، فإنه قد يكون أيضا منصة المرحلة أو الانخفاض بعد غاو القيمة .
الحل : تخفيف وإعادة اختبار عينات ذات قيمة عالية هو مفتاح الاعتراف هوك مثل تأثير .

3 . غير محددة ملزمة :
السبب : غير مكتملة أو غير مكتملة دي المغلف يؤدي إلى امتصاص البروتينات الأخرى أو الكشف عن مكونات النظام على وجه التحديد microplate . . . . . . .
الحل : التأكد من أن حزمة مغلقة خطوة كافية وموحدة . تحسين اختيار مانع التسرب ( مثل جيش صرب البوسنة ، مسحوق الحليب الخالي من الدسم ) ؛ زيادة عدد وكثافة الغسيل .

ثالثا - العوامل التشغيلية والصكوك : المتغيرات البشرية التي لا يمكن تجاهلها

1 . غسل غير كافية :
السببعدم كفاية غسل مرات ، وعدم كفاية حجم ، قصيرة جدا وقت الغمر أو السائل في حفرة لا تخلى عن quan ، مما يؤدي إلى عدم ربط الأجسام المضادة أو النجاسة انزيم المسمى بقايا ، وزيادة الخلفية إشارة .
الحل : التقيد الصارم بإجراءات الغسيل لضمان غسل مرات ، حجم ، غمر الوقت بات الجافة دي .

2 - سوء ظروف الحضانة :
السبب : درجة حرارة الحضانة عالية جدا أو طويلة جدا ، وتسريع استجابة غير محددة . لا تغطي أو تبخر السائل بين الثقوب في الحضانة .
الحل : استخدام معدات التحكم في درجة الحرارة دقيقة ( مثل ترموستات ، حمام الماء وعاء ) ؛ توقيت صارم ; عند الفقس ، ختم لوحة الأغشية المستخدمة في ختم microporous لوحات .

3 . عينة إضافة خطأ :
السبب : حجم العينة ، المعيار ، كاشف ليست دقيقة ( على سبيل المثال ، رأس بندقية ليست امتص تماما ، دي ليست فارغة تماما ) ؛ إضافة فتحة الخطأ .
الحل : معايرة ماصة بانتظام . توحيد أساليب التشغيل ؛ استخدام ماصات متعددة القنوات أو معدات التشغيل الآلي لتحسين الاتساق . التحقق من خطة أخذ العينات بعناية .

4 . أداة خطأ :
السبب : خطأ في اختيار مرشح ، مسار الضوء التلوث أو عدم معايرة الصك .
الحل : تأكد من أن طول موجة تصفية المستخدمة من قبل انزيم أداة وسم يتوافق مع متطلبات الركيزة . تنظيف مسار الضوء بانتظام و معايرة الصك .

البيئة والتلوث : الاضطرابات المحتملة في المختبر

1 - التلوث العابر :
السبب : تلوث بين العينات أو بين الكواشف يحدث أثناء أخذ العينات .
حلولتغيير بندقية رئيس في كثير من الأحيان . تجنب وضع كاشف زجاجة مفتوحة لفترة طويلة جدا . عينات مختلفة / الكواشف المستخدمة في حاويات خاصة .

2 - التعرض أو التلوث من الركيزة الحل :
السبب : التعرض للضوء الركيزة ( مثل TMB ) لفترة طويلة جدا . الحل هو الركيزة الملوثة ايونات المعادن أو غيرها من الأكسدة .
الحل : الركيزة الحل هو تجنب الضوء والحفاظ على استخدامها في الوقت المحدد . إعداد وتخزين الحاويات النظيفة .

نظام التحقيق وحل الاستراتيجية

إذا كانت قيمة العينة عالية جدا ، فمن المستحسن أن تتبع الخطوات التالية :

1 . تكرار التجربة :يؤكد تكرار النتائج .
2 - تخفيف العينة : هو الأسلوب الأكثر مباشرة لتحديد هوك تأثير مصفوفة تأثير .
3 - التحقق من منحنى القياسية / مراقبة الجودة : ضمان منحنى القياسية العادية ، ومراقبة الجودة في السيطرة على القيمة .
4 - التحقق من السجلات التجريبية : استعراض العمليات الرئيسية مثل حجم العينة ، الحضانة الوقت / درجة الحرارة ، والغسيل الداخلي .
5 - استبدال الكواشف : استخدام تركيبات جديدة أو دفعات جديدة من الكواشف الرئيسية ( وخاصة انزيم المسمى الأجسام المضادة ، ركائز ) .
6 . أداة المعايرة : تأكد من أن أداء انزيم أداة المعايرة العادية .
7 . مجموعة فارغة السيطرة : مثل عينة فارغة ، كاشف فارغة ، للمساعدة في تحديد مصدر إشارة الخلفية .
8 - الاتصال الدعم التقني : تقديم معلومات مفصلة عن التجربة ، والبحث عن مجموعات من الشركات المصنعة المهنية والدعم التقني .

هذه النتائج تشير إلى أن أنواع مختلفة من اليسا ( مباشرة ، غير مباشرة ، ساندويتش ، والمنافسة ) قد تكون مختلفة من الحساسية إلى المشاكل المذكورة أعلاه .


نتائج غير طبيعية من اليسا هو التحدي المشترك في عملية التجربة ، وارتفاع قيمة العينة يتطلب تحليل منهجي من خلال الجمع بين خصائص العينة ، كاشف الأداء ، تفاصيل التشغيل والعوامل البيئية . ونحن نوصي بأن تقوم بإنشاء عملية موحدة ونظام السجلات ، واستكشاف الأخطاء وإصلاحها خطوة بخطوة عندما تواجه مشاكل . كشريك مع التركيز على نوعية عالية من الحلول المناعية ، شنغهاي Keborui التكنولوجيا الحيوية المحدودة دائما يوفر لك الدعم التقني والمهني الأمثل المشورة لمساعدة البيانات التجريبية الخاصة بك حقيقية وموثوق بها .


السعي إلى الدقة يبدأ مع التفاصيل . كوبري البيولوجية ، يمكنك استكشاف حدود موثوق بها من المناعية .