الجرذ إليسا كيت هو أداة تستخدم عادة في البحث العلمي و الفحص السريري . ومع ذلك ، فإن عملية المحاكمة معقدة ، أي إهمال قد يؤدي إلى الفشل . تهدف هذه الورقة إلى تحليل منهجي مصادر الخطأ الشائعة في الفئران اليسا التجربة ، وتوفير مجموعة من استراتيجيات فعالة من أجل استكشاف الأخطاء وإصلاحها وتحسين نوعية البيانات .

مصادر الخطأ الشائعة في الوقت الحقيقي تجهيز مخطط

عندما تظهر نتائج غير طبيعية من إليسا ( على سبيل المثال ، منحنى القياسية ليست جيدة ، والتكرار هو الفقراء ، إشارة قيمة منخفضة جدا أو عالية جدا ) ، يجب علينا أولا تحليل بهدوء وتدريجيا التحقيق .

1 - مشكلة المنحنى القياسي

مشكلة الأداء : سوء تركيب خطي الفقراء .

الأسباب المحتملة والعلاج :

حل غير لائق و تمييع القياسية : تأكد من استخدام محدد تمييع حل . يجب أن تكون مختلطة تماما عندما المخفف ، وتجنب توليد فقاعات . ويقترح أن يتم استبدال رأس بندقية في كل خطوة من خطوات تخفيف .

احتضان الوقت غير كافية أو طويلة جدا : اتبع التعليمات بدقة وقت الحضانة الموصى بها ، واستخدام الموقت .

التلوث بين الثقوب : يجب الحرص على تجنب الرش عند أخذ العينات .

2 . ارتفاع إشارة الخلفية

عرض المشكلة : OD قيمة فارغة أو سلبية السيطرة على ثقب أعلى .

الأسباب المحتملة والعلاج :

غسل لوحة ليست كافية : تأكد من غسل السائل المخفف بشكل صحيح . ملء micropores في كل غسل ، نقع لمدة 30-60 ثانية ، ثم بات الجافة . ضربة الجافة هو المفتاح ، ولكن تجنب ترك لوحة مثقبة جافة تماما .

لا تغلق تماما دي : التحقق من ما إذا كان إغلاق السائل فعالة ، ما إذا كانت كافية . إغلاق الظروف الأمثل يمكن النظر فيها .

غير محددة ملزمة انزيم المسمى الأجسام المضادة : تحديد ما إذا كان تخفيف نسبة الأجسام المضادة هو الصحيح ، ما إذا كان بسبب تركيز عال جدا .

الركيزة الحل التلوث أو التعرض : TMB الركيزة يجب أن تكون عديم اللون وشفافة ، إذا كان الأزرق ، قد فشلت . تجنب الضوء والحفاظ على استخدامها في الوقت المحدد .

3 . حساسية منخفضة أو لا إشارة

مشكلة الأداء : التطوير التنظيمي قيمة العينات القياسية منخفضة جدا .

الأسباب المحتملة والعلاج :

كاشف إضافة خطأ أو إغفال : التحقق بعناية من إجراءات التشغيل للتأكد من أن أي كاشف ( مثل الكشف عن الأجسام المضادة ، انزيم القياسية ) مفقود .

درجة حرارة الحضانة غير لائق : معظم ردود الفعل التي أجريت في 37 ℃ اليسا ، وانخفاض درجة حرارة الغرفة يمكن أن تقلل بشكل كبير من كفاءة التفاعل .

فشل الكاشف : التحقق من ما إذا كانت مجموعات هي فعالة ، ولا سيما الإنزيمات والركيزات . تأكد من أن العينة لا تحتوي على مثبطات التي تؤثر على رد الفعل .

مشكلة العينة : الفئران قد تحتوي على تركيزات عالية من المواد الضارة ( مثل الدهون في الدم ، الهيموجلوبين ) . العينة بشكل صحيح المخفف أو الطرد المركزي .

4 - ضعف التكرار ( تباين كبير بين الثقوب )

المشكلة : هناك فرق كبير في التطوير التنظيمي القيم بين الثقوب .

الأسباب المحتملة والعلاج :

عملية أخذ العينات غير القياسية : معايرة ماصة بانتظام ، وذلك باستخدام تقنية أخذ العينات الصحيحة لضمان أن السائل هو إضافة إلى أسفل الحفرة دون الجدار .

عدم الاتساق : استخدام متعدد القنوات أو لوحة غسالة غسالة التلقائي لضمان الاتساق .

بيئة الحضانة غير موحدة : ضمان تغطية فتحة لوحة في الحضانة و وضعها في درجة حرارة الغرفة الأفقية لتجنب تأثير الحافة .

الكمال من المصدر : إنشاء قوية اليسا العملية التجريبية

فقط من خلال حل المشكلة لا يكفي ، من أجل تحسين نوعية التجربة ، ينبغي إنشاء مجموعة كاملة من القواعد العملية الوقائية .

1 . إعداد دقيق قبل التجربة

رات OMW إليسا كيت بعد استلام البضائع ، والتحقق على الفور ما إذا كانت مجموعات تحت ظروف النقل سلسلة التبريد ، والتحقق من أن جميع المكونات كاملة وغير التالفة .

الكواشف متوازنة تماما : إزالة جميع الكواشف ( ولا سيما معيار اختبار الأجسام المضادة ) من الثلاجة في 4 ℃ في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة على الأقل ، وتجنب تأثير الماء المكثف على التركيز .

عينة المعالجة : بعد أخذ العينات ، الطرد المركزي ، وإزالة الترسبات أو فيبرينوجين في مصل الدم ، البلازما ، أو الأنسجة من الفئران ، وتجنب انسداد المسام .

توحيد المشروع : قراءة التعليمات بالتفصيل قبل بدء التجربة ، ووضع إجراءات التشغيل القياسية ، وتحديد الوقت ، درجة الحرارة ، عينة من أجل كل خطوة .

2 . عملية دقيقة في التجربة

" في نفس الوقت " من حيث المبدأ : جميع الخطوات اللاحقة ( الأجسام المضادة ، الركيزة ، وما إلى ذلك ) ينبغي أن تبدأ مع إضافة معيار / عينة في نفس الفترة من الحضانة ، لضمان أن كل مسام وقت رد الفعل هو نفسه .

الدقة : استخدام ماصة ماصة معايرة ، عكس الأسلوب الموصى به من أجل تحسين دقة لزوجة عينة ( مثل مصل الفئران ) .

درجة الحرارة المثلى : استخدام سرير هزاز الأفقي درجة الحرارة يمكن أن تعزز الاتصال السائل ، وتحسين كفاءة التفاعل ، وجعل النتائج أكثر تجانسا . إذا لم يكن هناك سرير هزاز ، هزاز يدويا عدة مرات أثناء الحضانة .

غسل لوحة التوحيد : الحفاظ على تدفق الضغط و قوة الضرب في نفس الوقت عند غسل لوحة يدويا . يوصى بشدة استخدام غسالة أوتوماتيكية ، والتي يمكن أن توفر التكرار والكفاءة من دون بي .

3 - تحليل وتسجيل البيانات بعد التجربة

منحنى المناسب : لا عمياء استخدام خطي المناسب . من أجل تركيب المنحنى اللوجستي مع أربع معلمات ، يجب التأكد من أن النقطة الوسطى من المنحنى القياسي يقع في الجزء الخطي من تركيب المنحنى . إذا كان هناك أي شيء غير عادي ، ينبغي تحليل الأسباب واتخاذ قرار بشأن ما إذا كان أو لم يكن القضاء عليها .

مراقبة الجودة : في كل تجربة ، بالإضافة إلى المعايير والعينات ، ينبغي أن تشمل الضوابط الإيجابية والسلبية على حد سواء من أجل رصد فعالية النظام بأكمله .

سجل مفصل : سجل جميع التفاصيل ، بما في ذلك عدد من مجموعات ، وتجهيز العينات ، أي انحراف عن سوب ، الخ . هذه المعلومات هي الحاسمة في تتبع النتائج .

ثالثاً - ملخص

نجاح إليسا في الفئران هو تجسيد مي " تفاصيل تحديد النجاح أو الفشل " . في مواجهة الأخطاء ، يجب أن لا تتوقف عن حل سلبي ، ولكن بنشاط على إنشاء مجموعة من الوقاية والتنفيذ والتحقق من سلامة نظام الجودة .

من خلال استكشاف الأخطاء وإصلاحها وتحسين عملية منهجية ، يمكنك ليس فقط التعامل مع المشاكل في التجارب الحالية على نحو فعال ، ولكن أيضا إلى حد كبير تحسين دقة وموثوقية واستنساخ جميع إليسا البيانات في المستقبل ، وتوفير بيانات قوية لدعم البحوث ذات الصلة في الفئران .