انزيم مرتبط المناعي فحص ( ELISA ) هو تقنية حساسة للغاية التي تستخدم على نطاق واسع في مجال علوم الحياة و التشخيص السريري . ومع ذلك ، فإن النتائج الإيجابية الكاذبة التي تظهر في الماضي قد تضليل استنتاجات البحوث أو الأحكام السريرية . في هذه الورقة ، سوف نحلل بعمق أسباب متعددة من إليسا إيجابية كاذبة ، وتوفير مجموعة من التصميم التجريبي وتحليل النتائج من استراتيجية شاملة لتجنب لمساعدتك على الحصول على أكثر موثوقية ودقة البيانات .

معرفة إيجابية كاذبة : ما هي إليسا إيجابية كاذبة ؟
اليسا إيجابية كاذبة يشير إلى أن نظام الكشف عن خطأ يعطي إشارة إيجابية أو نتيجة ارتفاع تركيز عندما لا يوجد في الواقع أو تركيز منخفض جدا من المواد المستهدفة في عينة لفحصها . هذا ليس فقط يضيع قيمة العينات والكواشف ، ولكن أيضا من المرجح أن يؤدي إلى استنتاجات علمية خاطئة أو غير صحيحة القرارات الطبية .
من أجل تجنب إيجابية كاذبة ، يجب علينا أولا أن نفهم السبب الجذري .

تحليل عميق أسباب إيجابية كاذبة
أسباب إيجابية كاذبة اليسا معقدة ، والتي يمكن تلخيصها على النحو التالي : 1 .
1 - العوامل الكاشفة والخشب
تفاعل الأجسام المضادة عبر
السبب : هذا هو واحد من الأسباب الأساسية الأكثر شيوعا . التقاط الأجسام المضادة أو الكشف عن الأجسام المضادة ، بالإضافة إلى ملزمة محددة مستضد المستهدفة ، قد يكون أيضا غير محددة ملزمة مع البروتينات غير المستهدفة ( مثل البروتينات متشابه مع هيكل مماثل ، تدهور البروتين شظايا أو غيرها من المكونات غير ذات صلة في العينة ) . هذا رد فعل الصليب تنتج إشارات مباشرة ، مما يؤدي إلى إيجابية كاذبة .
على سبيل المثال : إذا كان هناك غيرها من السيتوكينات التي تنتمي إلى نفس العائلة و بنية مماثلة في عينة من السيتوكينات ، و خصوصية الأجسام المضادة غير كافية ، عبر رد فعل يحدث بسهولة .
غير محددة الامتزاز من انزيم كونجوجاتيس :
السبب : انزيم المسمى الأجسام المضادة أو streptavidin كونجوجاتيس ، من خلال التفاعل مسعور أو كهرباء ، غير محددة الامتزاز على microplate الجدار أو المغلفة الأجسام المضادة . حتى لو لم يكن هناك مستضد المستهدفة ، هذا الامتزاز يمكن أن يؤدي أيضا إلى تحفيز الركيزة اللون .
إغلاق غير كافية أو غير مكتملة
السبب : بعد microporous لوحة المغلفة مع الأجسام المضادة ، لا يزال هناك عدد كبير من المواقع ملزمة البروتين غير المحتل على لوحة . إغلاق خطوة تهدف إلى ملء هذه المواقع مع البروتينات الخاملة ( مثل جيش صرب البوسنة ، مسحوق الحليب الخالي من الدسم ، وما إلى ذلك ) لمنع غير محددة الامتزاز من عينة انزيم كونجوجاتيس . . . . . . . إذا كان اختيار غير لائق ، وعدم كفاية الوقت أو عدم إغلاق إغلاق السائل ، يمكن أن يؤدي إلى التعرض غير محددة ملزمة الموقع ، مما أدى إلى ارتفاع الخلفية الإيجابية الكاذبة .
الكواشف الملوثة أو المتدهورة :
السبب : الركيزة الحل هو ملوث ايونات المعادن أو مؤكسد ، مما قد يؤدي إلى اللون . تخزين غير لائق من الكواشف ( مثل تكرار التجميد والذوبان ، لا تجنب الضوء ) يمكن أن يؤدي إلى الفشل ، قد يؤدي أيضا إلى ردود فعل غير طبيعية .
2 - عوامل العينة
تدخل الأجسام المضادة :
السبب : الأجسام المضادة التي تربط نادي القوات المسلحة البوروندية أو أجزاء من عدة أنواع من مفتش ، أو heterophil الأجسام المضادة ، قد تكون موجودة في الإنسان أو الحيوان المصل / البلازما عينات . أنها يمكن أن تكون بمثابة " جسر " و في نفس الوقت ربط التقاط الأجسام المضادة للكشف عن الأجسام المضادة ، حتى في غياب المستضدات يمكن أن تشكل كامل " ساندويتش " هيكل ، مما أدى إلى إشارات إيجابية كاذبة قوية . . . . . . .
عامل الروماتويد ( RF ) التدخل :
السبب : عامل الروماتويد هو نوع من الأجسام المضادة IgG ( IgM ) التي يشيع استخدامها في المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية . فإنه يمكن ربط مباشرة إلى نادي التقاط الأجسام المضادة ، ثم يضاف إلى نادي مفتش مع الكشف عن الأجسام المضادة المحددة ، وبالتالي محاكاة مستضد الضد رد فعل إيجابية كاذبة .
تأثير مصفوفة العينة :
السبب : تكوين عينة معقدة ( على سبيل المثال ، الدهون في الدم ، الهيموغلوبين ، الخ ) ، و الخصائص الفيزيائية والكيميائية قد تتفاعل مع نظام إليسا ، على سبيل المثال ، تغيير نشاط الأجسام المضادة ملزمة أو تعزيز غير محددة الامتزاز .
التلوث عبر
السبب : في عملية أخذ العينات ، الهباء الجوي أو بقايا قطرات من عينة إيجابية أو عالية التركيز القياسية ترش في المتاخمة السلبية أو انخفاض تركيز المسام المسام .
3 - عوامل التشغيل والمعدات
غسل لوحة لا تشوبه شائبة دي :
السبب : هذه هي الخطوة الرئيسية التي غالبا ما يتم تجاهلها . غسل يهدف إلى إزالة غير ملزمة عينة من البروتين ، انزيم كونجوجاتيس وغيرها من المواد المزعجة . إذا كان عدد مرات غسل لوحة ليست كافية ، حقن السائل في كل حفرة ليست كافية ، غمر الوقت قصير جدا ، أو بقايا سائل الغسيل لا يكفي بات الجافة ، وسوف يؤدي إلى غير محددة ملزمة المواد المتبقية ، مما تسبب في ارتفاع الخلفية و إيجابية كاذبة .
الخطأ في أخذ العينات والتلوث :
السبب : الخطأ أو التلوث يمكن أن يؤدي إلى استخدام ماصة غير معايرة ، شفط مع الملوثات ، رش السائل أو فقاعات الهواء أثناء أخذ العينات .
سوء ظروف الحضانة :
السبب : درجة حرارة الحضانة عالية جدا أو طويلة جدا ، قد تزيد من غير محددة ملزمة . عندما يفقس ، لا تستخدم لوحة ختم الفيلم أو تغطية غير كافية ، مما أدى إلى تبخر السائل ، حافة حفرة تركيز زيادة ، مما أدى إلى " تأثير الحافة " .
نتيجة سوء التفسير :
السبب : خارج نطاق اختبار خطي من الانزيم . فترة طويلة جدا من الركيزة اللونية يؤدي إلى رد فعل التشبع . خطأ الطول الموجي أو طريقة الحساب المحددة عند قراءة البيانات .

عموما تجنب الاستراتيجية : كيفية تقليل إيجابية كاذبة إلى أقصى حد دي

وللأسباب المذكورة أعلاه ، نقترح الحلول المنهجية التالية :
1 . إعداد دقيق قبل التجربة
اختيار نوعية عدة : إعطاء الأولوية لاختيار العلامة التجارية ذات السمعة الطيبة و ثبت . . . التركيز على ما إذا كانت خصوصية الأجسام المضادة قد تم اختبارها بدقة ، إذا كان يحتوي على الأجسام المضادة ضد heterophil الترددات اللاسلكية مانع .
عينة المعالجة : في مصل الدم / البلازما عينات ، مصفوفة الآثار والتدخل يمكن تخفيضها عن طريق الطرد المركزي ، تمييع ، أو باستخدام عينة محددة من المعالجة وكيل .
معيار إعداد الكواشف : بدقة وفقا لتعليمات حل تمييع الكواشف لتجنب تكرار التجميد والذوبان . تأكد من أن جميع الكواشف متوازنة إلى درجة حرارة الغرفة قبل استخدامها .
2 . عملية دقيقة في التجربة
وضع ضوابط علمية :
ثقب فارغ : تحتوي فقط على الركيزة و إنهاء السائل ، وتستخدم لمعايرة نقطة الصفر من الصك .
السلبية : السيطرة على عينة محددة دون مستضد المستهدفة المستخدمة لتحديد مستوى الخلفية إشارة .
مراقبة إيجابية : تستخدم لرصد ما إذا كان النظام بأكمله يعمل بشكل صحيح .
المهم : إنشاء " عينة استبدال السيطرة " : فقط إضافة عينة مخفف في المسام دون عينة ، نفس الخطوات اللاحقة . إذا كان هناك إشارة واضحة في هذه الحفرة ، فإنه يشير بقوة إلى أن الكاشف أو اللوح نفسه لديه مشكلة .
عينة الأمثل بالإضافة إلى الحضانة :
تجنب فقاعات الهواء باستخدام معايرة ماصة ونظيفة شفط .
اتبع بدقة الموصى بها الحضانة الوقت ودرجة الحرارة ، تأكد من استخدام ختم الفيلم عند الحضانة .
غسل كامل
هذا هو " شريان الحياة " كامل إليسا التجربة . تأكد من أن خط أنابيب آلة الغسيل على نحو سلس ، كل حفرة مليئة سائل الغسيل .
عندما يتم غسل لوحة يدويا ، بعد حقن سائل الغسيل ، لا يزال قائما لمدة 30-60 ثانية ، ثم يجف بالقوة ، ورقة ماصة مضروب عدة مرات لضمان عدم وجود بقايا في الحفرة .
اتبع التعليمات الموصى بها عدد مرات الغسيل ، لا تقلل من ذلك .
3 . تحليل دقيق بعد التجربة
تحديد عتبة معقولة : من أجل الكشف النوعي ، حساب قيمة قطع ينبغي أن تستند إلى عدد كبير من البيانات الإحصائية السلبية ، والنظر في بعض المناطق الرمادية .
التحقق من صحة البيانات : تكرار التجارب يجب أن تتم على عتبة إيجابية أو غير طبيعية عالية التطوير التنظيمي القيم . إذا لزم الأمر ، طريقة أخرى ( مثل لطخة غربية ، لمعان كيميائي ) يمكن استخدامها للتحقق من صحة العينة .
استخدام حاصرات : عينات يشتبه في وجود الأجسام المضادة أو الترددات اللاسلكية heterophil تدخل قبل الكشف عن الأجسام المضادة التجارية heterophil حاصرات أو استخدام أنواع معينة من غير مصل مناعي قبل الحضانة ، يمكن تحييد التدخل بفعالية .

اليسا إيجابية كاذبة هي المشكلة الناجمة عن عوامل متعددة ، والتي تحتاج إلى معرفة نظرية منهجية وصارمة عادة التشغيل . من خلال فهم الآلية الكامنة وراء ذلك - من خصوصية الأجسام المضادة ، عينة تدخل تفاصيل التشغيل - واتخاذ التدابير الوقائية والتصحيحية ، يمكننا تحسين دقة وموثوقية الكشف عن إليسا إلى حد كبير .
ملخص عملية التحايل الأساسية :
اختيار نوعية جيدة عدة ، وتوحيد معالجة العينات ، وإنشاء مجموعة كاملة من الضوابط ، عملية دقيقة و chedi الغسيل ، تحليل البيانات والتحقق من صحة صارمة
اتبع هذه الاستراتيجية ، سوف تكون قادرة على الاستفادة القصوى من التكنولوجيا إليسا ، وجعل البيانات العلمية أو نتائج التشخيص أكثر موثوقية .