دقة وكفاءة التحليل الكمي والنوعي من الجزيئات المستهدفة أمر بالغ الأهمية في مجال علوم الحياة ، والتشخيص السريري والصيدلة البيولوجية . انزيم مرتبط المناعي فحص ( ELISA ) أصبح المعيار الذهبي تقنية في المختبر بسبب حساسية وخصوصية عالية الإنتاجية من zouyue . . . . . . . ومع ذلك ، مع ظهور عدة إليسا ، عملية تدفق هذه التكنولوجيا المعقدة موحدة وبسيطة ، مما يجعل من الممكن للباحثين والمختبرات السريرية للحصول على نتائج موثوق بها بسهولة .

المبدأ الأساسي : إليسا محددة ملزمة مستضد الضد

المبدأ الأساسي من إليسا هو استخدام محددة للغاية استجابة مناعية بين مستضد الضد و تضخيم الإشارات والكشف عن طريق انزيم القياسية . وباختصار ، مثل مفتاح واحد فقط يمكن فتح القفل ، الأجسام المضادة عادة فقط تحديد وربط مستضد معين .

هناك عدة أنواع من اليسا حسب الهدف وطريقة الكشف .

إليسا مباشرة

المبدأ : مستضد يمكن الكشف عنها مباشرة كثف على الناقل الصلبة ( على سبيل المثال ، 96 لوحة المسام ) ، ثم إضافة انزيم المسمى محددة لمكافحة ملزمة . بعد إزالة الأجسام المضادة غير الملزمة ، انزيم الركيزة المضافة لتوليد الإشارات .

الميزات : أقل خطوات التشغيل ، وسرعة عالية ، ولكن قد يكون إشارة ضعيفة ، و كل موضوع يحتاج إلى اختبار انزيم محددة المسمى الضد .

إليسا غير المباشرة

المبدأ : مستضد المغلفة على لوحة ، أولا ، غير المسمى antibody تضاف إلى الجمع بين مستضد ، ثم انزيم المسمى antibody ( تحديد الأجسام المضادة ) تضاف إلى الجمع . وأخيرا ، إضافة الركيزة اللون .

الخصائص : إشارة التضخيم تأثير شو ( واحد يمكن أن تكون جنبا إلى جنب مع العديد من اثنين من الأجسام المضادة ) ، حساسية عالية ، عالمية قوية ( نفس المصدر من نفس النوع من الأجسام المضادة يمكن أن تستخدم نفس الانزيم المسمى اثنين من الكشف عن الأجسام المضادة ) ، هي واحدة من أكثر الطرق المستخدمة في تشانغ .

ساندويتش إليسا

المبدأ : هذه هي الطريقة الأكثر حساسية وخصوصية للكشف عن البروتين مستضد . " التقاط الأجسام المضادة " يستخدم أولا أن تكون مغلفة مع انزيم المسمى لوحة التقاط مستضد المستهدفة في العينة . ثم آخر " الكشف عن الأجسام المضادة " أضيفت إلى ربط آخر حاتمة من المستضد على شكل ساندويتش هيكل " الضد مستضد الضد " . الأجسام المضادة التي يمكن الكشف عنها بواسطة انزيم المسمى ( الأسلوب المباشر ) ، أو عن طريق انزيم المسمى الأجسام المضادة ( الأسلوب غير المباشر ) .

الخصائص : حساسية عالية وخصوصية قوية ، ومناسبة للكشف عن تركيز منخفض من المستضدات في عينات معقدة ( مثل مصل الدم ، خلية ثقافة طاف ) . معظم مجموعات إليسا التجارية تستخدم هذا الشكل .

إليسا التنافسي

المبدأ : تستخدم أساسا للكشف عن جزيء صغير المستضد ( ناشبة ) . مستضد اختبار في العينة يتنافس مع كمية محددة من انزيم المسمى مستضد الضد ملزمة محدودة . أعلى تركيز المستضد في العينة ، أقل انزيم مرتبط مستضد الضد ، أضعف إشارة .

الخصائص : كثافة إشارة تتناسب عكسيا مع تركيز المواد التي سيتم الكشف عنها ، ومناسبة للكشف عن المواد الجزيئية الصغيرة ( مثل الهرمونات والأدوية ) .

إشارة الكشف : في أي شكل من الأشكال ، انزيم الركيزة يجب أن تضاف في نهاية المطاف . الإنزيمات الشائعة هي هورس راديش پراكسيداز ( HRP ) الفوسفاتيز القلوية ( ا ف ب ) . الركيزة يتفاعل مع الانزيم المحفز لإنتاج المنتجات الملونة . عمق اللون يتناسب طرديا مع تركيز الجزيئات المستهدفة في العينة ، ثم منحنى القياسية يمكن رسمها و تركيز دقيق يمكن حسابها عن طريق قياس قيمة الامتصاصية بواسطة انزيم أداة رسم الخرائط .

عدة إليسا ، إليسا كيت

براعة عدة إليسا يجعلها رائعة في العديد من المجالات :

التشخيص السريري

الكشف عن الأمراض المعدية : الكشف عن الأجسام المضادة الفيروسية ( مثل فيروس نقص المناعة البشرية ، التهاب الكبد باء ، التهاب الكبد الوبائي ، أو مستضد .

رصد مستوى الهرمون : قياس الأنسولين ، هرمون الغدة الدرقية ، هرمون الجنس ، وهلم جرا .

فحص علامات الورم : الكشف عن وكالة فرانس برس ( أ ف ب ) ، لجنة التأمين ( المستضد سرطاني ) ، بسا ( مستضد البروستات محددة ) وهلم جرا .

تشخيص أمراض المناعة الذاتية : الكشف عن عامل الروماتويد ، الأجسام المضادة ، وهلم جرا .

بحوث علوم الحياة

السيتوكينات مسارات الإشارات : التحليل الكمي من IL - 6 ، تنف

البروتين التعبير والتفاعل .

تطوير وتقييم فعالية الدواء : قياس تركيز الدواء في الجسم الحي وأثره على المؤشرات الحيوية .

سلامة الأغذية والحجر الصحي الحيواني :

اختبار الحساسية : اختبار الحساسية الغذائية مثل الفول السوداني ، الغلوتين .

الكشف عن السموم : مثل الأفلاتوكسين .

الكشف عن بقايا العقاقير البيطرية .

تشخيص الأمراض الحيوانية والنباتية .

إجراءات التشغيل القياسية إليسا كيت

طقم إليسا التجاري يوفر جميع الكواشف اللازمة والأمثل للبروتوكول ، وعادة ما تحتوي على الخطوات الرئيسية التالية :

التحضير قبل التجربة :

إزالة عدة من الثلاجة واستعادة جميع الكواشف إلى درجة حرارة الغرفة ( حوالي 30 دقيقة ) .

إعداد العينات القياسية ومراقبة الجودة .

إعداد المطلوب غسل السائل ، السائل العامل للكشف عن الأجسام المضادة ، الخ .

عملية تدفق :

1 . حزمة مع إغلاق : ( بعض مجموعات كانت معبأة مسبقا ، يمكنك تخطي هذه الخطوة )

طلاء : إضافة إلى التقاط الأجسام المضادة انزيم المسمى لوحة المسام ، في ظل الظروف المناسبة ، درجة الحرارة ، حتى أن الأجسام المضادة هي كثف على جدار المسام .

غسل : التخلص من السائل ، وتنظيف لوحة المسام عدة مرات مع سائل الغسيل ، وإزالة الأجسام المضادة غير الملزمة .

إغلاق : إضافة إلى إغلاق السائل ( على سبيل المثال ، جيش صرب البوسنة ، الحليب الخالي من الدسم ) ، وملء المسام التي لا تحتلها الأجسام المضادة ، ومنع غير محددة الامتزاز في الخطوة التالية ، والحد من الخلفية .

2 . إضافة عينة و درجة الحرارة :

سلسلة من المنتجات القياسية ، عينة لفحصها ومراقبة الجودة من المنتجات مع تركيز معروف تضاف إلى المسام ، على التوالي .

ختم لوحة المسام ، في درجة حرارة معينة لفترة معينة من الوقت ، بحيث يتم القبض على مستضد الضد المستهدفة .

3 . غسل :

التخلص من السائل في الحفرة ، ملء الحفرة مع سائل الغسيل ، وقفة لفترة من الوقت بعد التخلص منها ، كرر 3-5 مرات . هذه الخطوة أمر بالغ الأهمية ، يمكن إزالة المواد غير الملزمة تماما دي ، هو المفتاح للحصول على خلفية منخفضة وارتفاع نسبة الإشارة إلى الضوضاء .

4 . إضافة اختبار الأجسام المضادة :

انزيم المسمى الكشف عن الأجسام المضادة تضاف إلى كل حفرة . الأجسام المضادة التي تربط إلى حاتمة أخرى من القبض على مستضد المستهدفة على شكل شطيرة الهيكل .

ثم يتم غسلها لإزالة الأجسام المضادة غير الملزمة .

5 . إضافة الركيزة الحل :

إضافة جديدة انزيم الركيزة الحل ( على سبيل المثال ، TMB ) في كل مسام . في الظلام ، انزيم يحفز رد فعل الركيزة لإنتاج الأزرق ( TMB ) المنتج .

6 - إنهاء الردود والقراءات :

إضافة إلى إنهاء الحل ( مثل حامض الكبريتيك ) ، رد فعل على الفور توقف ، الحل من اللون الأزرق إلى الأصفر .

الامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) في كل مسام تم قياسها باستخدام انزيم العلامات على طول موجة معينة ( على سبيل المثال ، TMB 450nm ) في غضون فترة قصيرة من الوقت بعد رد الفعل توقف ( عادة في غضون 30 دقيقة ) .

7 - تحليل البيانات :

منحنى القياسية هي مرسومة على أساس تركيز المواد القياسية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي القيم .

عن طريق استبدال قيمة التطوير التنظيمي في منحنى القياسية ، دقة تركيز مستضد المستهدفة في العينة يمكن حسابها .

لماذا نختار عدة إليسا ؟

حساسية عالية واسعة النطاق الديناميكي : يمكن الكشف عن تركيزات منخفضة مثل جزء لكل تريليون / مل ، وتغطي مجموعة واسعة من الخطية .

zhuoyue خصوصية : الأجسام المضادة عالية الجودة التي تم التحقق منها بدقة لضمان منخفضة للغاية عبر ردود الفعل .

ممتازة التكرار : الفرق بين داخل و بين دفعات صغيرة ، مما يضمن أن النتائج التجريبية مستقرة وموثوق بها .

عملية بسيطة وسريعة : توفير ما قبل المغلفة لوحة ، على استعداد لاستخدام الكواشف و تعليمات مفصلة ، مما يقلل كثيرا من وقت الاختبار .

خط كامل من المنتجات : تغطي مجموعة متنوعة من أجناس متعددة الأهداف ، لتلبية الاحتياجات البحثية المتنوعة الخاصة بك .

كما ناضجة وفعالة وحساسة أداة الكشف البيولوجي ، إليسا كيت أصبحت حجر الزاوية في تحديد وتحليل البروتين في المختبرات الحديثة . يمكن أن توفر بيانات موثوق بها لدعم البحوث العلمية المتقدمة ، فضلا عن دقة التشخيص السريري . اختيار عالية الجودة عدة إليسا هو الخطوة الأولى في نجاح التجربة الخاصة بك .

مرحبا بكم في شركتنا ، ونحن نبحث عن عدة إليسا . شعرت إن أيّ أسئلة فنيّة , رجاء حرّة أن اتّصل ب نا فنيّة دعم فريق .