-
البريد الإلكتروني
3004965510@qq.com
-
الهاتف
15000017673
-
العنوان
منطقة سونغ جيانغ ، شنغهاي
فئات المنتج
شنغهاي bangjing الصناعة المحدودة
نظرة عامة
MTT أدوات المقايسة المحدودة هي بيع المنتجات : PC-3M ( الإنسان خلايا سرطان البروستاتا ) 5 التابير . 2-295 ( الإنسان خلايا دبقي الخبيثة XG ) 5 التابير . 2smc-1 ( الإنسان خلايا ورم الجنبي ) 5 أمبير ؛ التابير . 106cells / زجاجات التابير . 2sw1116 ( الإنسان خلايا غدية القولون ) 5 التابير . 106cells / زجاجات التابير . 2-13 ( الإنسان خلايا سرطان المريء ) 5 التابير . 106cells / زجاجات التابير . 2 .
تفاصيل المنتج
معلمات المنتج :
| الاسم الصيني | الاسم الإنجليزي | مواصفات المنتج | رقم المنتج |
| MTT اختبار كيت | مجموعة اختبار MTT | مرة | بي جي-01X6322 |
MTT يستخدم على نطاق واسع في الكشف عن نمو الخلايا ، من حيث المبدأ ، MTT يمكن خفضها من قبل نازعة في الميتوكوندريا من الخلايا الحية على شكل بنفسجي غامق فورموزان كريستال ، في حين أن الخلايا الميتة لا يكون هذا النشاط . بعد حل فورموزان الكريستال الأرجواني الداكن ، يمكن قياس تركيز من خلال قياس امتصاص الضوء في 490nm الطول الموجي . أكثر سمية ، وانخفاض الامتصاصية .
تفاصيل المنتج :
| ميزات المنتج : 1 . استخدام * فورموزان حل ، حل كامل فورموزان ، والحد من الأخطاء . 2 . انخفاض الخلفية ، حساسية عالية ، واسعة النطاق الخطي ، التكرار جيدة . 3 . هذا المنتج هو ما يكفي من 500 مرة ( 5 96 خلية ثقافة المجلس ) microplate الكشف . 4 . يمكن أن تستخدم في الكشف عن النشاط البيولوجي عامل ، فحص المخدرات انتيتومور ، السمسة ، radiosensitivity الورم وهلم جرا . ظروف التخزين : النقل في درجة حرارة منخفضة ، والحفاظ على - 20 ℃ ( ولكن الحل ب يمكن نقلها وتخزينها في درجة حرارة الغرفة ) ، صالحة لمدة سنة واحدة . طريقة الاستخدام : الإجراء التالي هو اختبار السمية ، وغيرها من التطبيقات التي هي مماثلة أو أبسط ( مثل منحنى النمو اختبار ) ، يمكن إجراء تعديلات طفيفة على هذا الأساس ، لذلك لا مزيد من التفاصيل . تطعيم الخلايا 1 - هضم الخلايا أحادية الطبقة المتقاربة حسب الطريقة التقليدية في الهضم ، وجمع في المصل تحتوي على وسائل الإعلام . 2.200g الطرد المركزي لمدة 5 دقائق لجمع الخلايا عجل . 3 - تعليق خلية واحدة تم إعدادها من قبل هطول الأمطار من تعليق خلية متوسطة . 4 - تمييع الخلايا إلى 2.5 × 103 / مل ～ 5 × 10 / مل ( اعتمادا على معدل نمو الخلايا ) ، إذا كان عدد الخلايا غير معروف ، يمكن أن تضعف إلى 1 × 10 / مل . 5 - نقل ما يكفي من تعليق خلية في طبق الثقافة ( من السهل أخذ العينات مع بندقية التفريغ ) . فحص MTT من 96 - فتحة لوحة يتطلب حوالي 20 مل من تعليق خلية . 6 - 200 μ ل تعليق خلية ( الخلايا الطبيعية ) أضيفت إلى مركز كل ثقب في العمود 2-11 من 96 حفرة لوحة . إذا كانت الخلايا السرطانية ، 100 ميكرولتر من الخلايا السرطانية تعليق 100 ميكرولتر متوسطة الثقافة ( مجموع حجم 200 ميكرولتر ) أضيفت . ملاحظة : تأكد من وضع الخلايا في مركز الثقب ، وإلا فإن الخلايا سوف تتجمع في الزاوية من الحفرة ، مما يؤثر على الاختبار . 7 - متوسطة الحجم مع تعليق خلية أضيفت إلى كل من الأولى والثانية عشرة من الثقوب التي تم إزالتها من 96 لوحة المسام مع بندقية . كل مسام في العمود الأول سيكون بمثابة خلية متوسطة + MTT السيطرة ( ضبط صفر في التطوير التنظيمي ) ، في حين أن تأثير إضافة متوسطة في العمود 12 هو الحد من تأثير الحافة على رد فعل في العمود 11 . 8 - احتضان الخلايا في 37 ℃ و 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون لمدة 1-3 أيام ، مما أدى إلى نمو الخلايا المتسارع الفترة . العلاج بالعقاقير 9 - تمييع المخدرات إلى 8 تركيزات ( إذا لم تكن معروفة ، يجب أن تكون محددة من قبل الاختبار ) في المتوسط . 10 - إزالة وسائل الإعلام ( لا تلمس الخلايا ) من الثقوب في الأعمدة من 2 إلى 11 ( 10 ) ، والحفاظ على وسائل الإعلام في الثقوب في الأعمدة من 1 إلى 12 . 11 - 200 ميكرولتر من وسائل الإعلام الجديدة أضيفت إلى كل مسام في عمودين 2 و 11 ( المجموع 2 ) التي كانت بمثابة مراقبة + متوسطة + خلية المخدرات . 12 - إضافة 8 التدرج في تركيز الدواء في كل ثقب في العمود 3 إلى 10 ( مجموع 8 أعمدة ) ، إضافة تركيز الدواء في كل عمود . 13 - في ظل حالة من 37 ℃ و 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون ، 96 - فتحة لوحة احتضنت لفترة معينة من الوقت ، وهذا هو ، وقت العلاج من المخدرات ، التي يحددها المستخدم . 14 - بعد العلاج ، وسائل الإعلام في جميع المسام من 2 إلى 11 ( 10 خطوط تحتوي على الخلايا ) أزيلت ، ثم 100 ميكرولتر من وسائل الإعلام الجديدة أضيفت . 15 - عدد الخلايا بنسبة 2-3 مرات في اليوم الواحد ( الوقت اللازم يختلف مع الخلايا ) . عدد الخلايا الحية 16 - في نهاية مرحلة النمو ، 100 μ ل و 10 μ ل حل ( بما في ذلك MTT ) أضيفت بعد إزالة وسائل الإعلام من الثقوب في الصفوف من 1 إلى 11 ، 96 لوحة مثقبة كانت ملفوفة في احباط القصدير ، ثم كان مثقف لمدة 4 إلى 8 ساعات في 37 ℃ و 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون . ملاحظة : الحل سوف تجمد في درجة حرارة منخفضة ، يرجى وضعها في درجة حرارة الغرفة أو 20-25 ℃ حمام الماء حتى يذوب تماما ، يهز جيدا بعد الاستخدام . MTT السرطان ، يجب أن تعمل مع القفازات . 17 - الحرص على استيعاب والتخلص من وسائل الإعلام ( بما في ذلك حل ) في المسام ، لأن وسائل الإعلام قد تؤثر على امتصاص الضوء ، فمن الأفضل لإزالة قدر الإمكان . 18 - حل ب 100 μ ل أضيفت إلى كل حفرة ، متذبذبة على سرعة منخفضة لمدة 10 دقائق ، مما أدى إلى حل كامل فورموزان كريستال التي شكلتها MTT . 19 - بسبب عدم استقرار المنتج ، 490nm الامتصاصية يجب أن يكون على الفور اختيار انزيم مرتبط المناعي فحص . ملاحظة : استخدام العمود الأول من كل مسام ( + متوسطة - خلية + MTT السيطرة ) ضبط الصفر . 20 - عد متوسط كل تكرار نفس المعاملة . 21 - رسم منحنى مع تركيز الدواء مثل المحور الأفقي ، الامتصاصية مثل المحور الطولي . لأن القيمة المطلقة من الامتصاصية تختلف اختلافا كبيرا بين العلاجات ، فإنه عادة ما يكون من الضروري تحويلها إلى تثبيط نمو قيم ( متوسط عدد المسام البيانات في الصفوف 2 و 11 من دون دواء هو 100 ٪ ) ، مما يسهل حساب IC50 لمقارنة آثار مختلف العلاجات الدوائية . ملاحظة : إذا كان منحنى النمو يقاس الوقت هو المحور الأفقي . منحنى النمو الطبيعي هو عادة من نوع S ، ولكن المنحدر هو زيادة . |
تقرير تجريبي
الفصل و الثقافة :
1 - تحت ظروف معقمة ، الأذين الأنسجة من 1-3d-old الفئران SD تم إزالتها ، ثم تم غسلها مرتين مع برنامج تلفزيوني .
2 - إضافة 4 مل من انزيم الهضم حل ( 0.1 في المائة و 0.1 في المائة كولاجيناز النوع الأول ) إلى الأنسجة كتلة ، تعليق لمدة 10 ثوان ، والهضم في 37 ℃ لمدة 10 دقائق ، ثم ضربة بالقطارة لجعل تعليق خلية واحدة ، هطول الأمطار الطبيعية وجمع طاف ، مع 10 ٪ FBS وسائل الإعلام إنهاء الهضم بعد 4 ℃ . . . . . . .
3 - إضافة 3-4ml انزيم الهضم حل بقية الأنسجة ، تعليق لمدة 10 ثوان ، هضم في 37 ℃ لمدة 10 دقائق ، ثم جمع supernatants ووضع في 4 ℃ بعد إنهاء الهضم .
4 ، 200 شبكة الفولاذ المقاوم للصدأ الشاشة المستخدمة لتصفية الخلية الهضم ، 1200r / دقيقة الطرد المركزي لمدة 10 دقائق ، إزالة طاف ، 10 ٪ من dmem FBS / F12 الخلايا المترسبة مع تعليق متوسطة ، تلقيح في 25 سم 2 زجاجة ، وضعت في 37 ℃ ، 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون حاضنة الثقافة ؛
5 - بعد 1 ساعة من الخلاف ، متوسطة الثقافة امتص و تلقيح في 6-hole لوحة .
ثانيا - تحديد مناعي :
1 . عندما الخلايا العضلية الأذينية تنمو إلى 80 ٪ فيوجن ، الخلايا التي تم غسلها مرتين مع برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ، ثم الخلايا كانت ثابتة لمدة 15 دقيقة مع 4 ٪ polyformaldehyde في درجة حرارة الغرفة .
2 - برنامج تلفزيوني شطف الخلايا مرتين في كل مرة لمدة 10 دقائق ، ثم في 4 ℃ 0.1 ٪ تريتون x-100 غشاء نفاذية لمدة 15 دقيقة .
3 - برنامج تلفزيوني شطف الخلايا مرتين ، كل 10 دقائق ، ثم في درجة حرارة الغرفة مع 4 ٪ جيش صرب البوسنة لمدة 30 دقيقة .
4 ، وفقا لنسبة 1 : 100 تمييع α - أكتين ، ثم وضعها في الثلاجة لمدة 4 ℃ احتضان الخلايا بين عشية وضحاها .
5 - برنامج تلفزيوني شطف الخلايا ثلاث مرات ، كل 10 دقائق ، وفقا لنسبة 1 : 150 تمييع المضادة α - أكتين ، في 37 ℃ لمدة 1 ساعة .
6 ، مع برنامج تلفزيوني شطف 3 مرات ، في كل مرة 10 دقائق ، وأخيرا تحت المجهر مضان مقلوب لمراقبة الصور والتقاط الصور .
خطوات التدريب :
1 - إزالة الزجاج من 75 ٪ إيثانول مع تغطية ورقة ملقط ، يمسح نظيفة مع قماش حريري معقم ، لا تستخدم الشاش .
2 - وضع غطاء الزجاج برفق في 6-hole لوحة الثقافة ( قطعة واحدة في كل حفرة ) أو في طبق الثقافة ( 2-3 قطعة في كل طبق مسطح يمكن وضعها ) ؛
3 - تشعيع 2-3 ساعات في 20-30 سم من الأشعة فوق البنفسجية مصباح .
4 - نقل عد تعليق خلية في الثقافة لوحة ، بحيث تغطي الزجاج * مغمورة في الثقافة المتوسطة .
5 - الثقافة لوحة احتضنت في 37 ℃ لمدة 2-3 أيام في 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون حمام الماء عندما الخلايا الملتصقة تنمو إلى 2 / 3 من المنطقة التي تغطي الجزء السفلي من الثقافة لوحة ، لوحة الثقافة يؤخذ بها ، وتغطي لوحة الزجاج مأخوذ برفق مع تغطية ملقط ، ثم شطف مع الماء المقطر ، ثم بسرعة ثابتة و immunocytochemistry الكشف عنها .
النقاط التجريبية والتعليمات :
1 . هذا الأسلوب هو مناسبة لأنّ زراعة الخلايا الملتصقة ، ولكن ليس تعليق خلية ثقافة .
2 - تغطية الزجاج المستخدمة يجب أن تكون ذات جودة عالية من الزجاج ، حمض الكروميك الحل ؛
3 - تغطية الشريحة رقيقة جدا ، هشة ، مع وضع غطاء الشريحة عند الحركة الخفيفة ؛
4 . إذا كان هناك المزيد من الخلايا التي تنمو في نفس الدولة ، أكبر طبق الثقافة يمكن استخدامها ، ولكن لا ينبغي أن تكون كبيرة جدا ، من أجل تجنب النفايات من الثقافة المتوسطة وزيادة احتمال التلوث .
5 . إذا كانت الخلايا تنمو بشكل سيئ ، يمكن أن تكون مغمورة في 0.5 ٪ polylysine الحل لمدة 5-10 دقائق و تجف بشكل طبيعي .
نقاط التشغيل :
1 ) سخن متوسطة الثقافة في 37 ℃ حمام الماء وعاء ; إعداد 15ml العقيم أنبوب الطرد المركزي ، إضافة 8ml سخن متوسطة .
2 ) إزالة الخلايا المجمدة من النيتروجين السائل وعاء ، ووضعها بسرعة في حمام الماء وعاء 37 درجة مئوية إلى إعادة تسخين ( يمكن إعداد كوب نظيف ، مملوءة بالماء 37 درجة مئوية ، بعد إزالة الخلايا المجمدة أنبوب التخزين بسرعة في الكأس ، ثم نقلها تدريجيا إلى حمام الماء وعاء ) . يهز أنبوب التخزين البارد بلطف حتى أن الخلايا يمكن أن تذوب في 1 ~ 2 دقيقة ، حتى أن الخلايا يمكن أن تمر في أقرب وقت ممكن من خلال أكثر عرضة للتلف في درجة الحرارة ( - 5 ~ 0 ℃ ) . ملاحظة لا يمكن أن تكون مغمورة في الماء و BRL ( الفئران خلايا الكبد ) يمكن تجنب التلوث .
3 ) استخدام الكحول 75 ٪ لمسح أنبوب التخزين المجمد ، ثم وضعها في سوبر نظيفة الجدول ، نقل الخلايا في أنبوب الطرد المركزي على استعداد ، تهب بلطف السائل ، حتى أن الخلايا موزعة بالتساوي ، والحد من تركيز DMSO ، تهب لتجنب فقاعات الهواء . جدار الأنبوب هو غسلها مع الطازجة متوسطة الثقافة مرتين ، ثم نقلها إلى أنبوب الطرد المركزي .
4 ) 800rpm الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، والتخلي عن طاف ، إضافة جديدة متوسطة الثقافة ، ضربة في تعليق خلية .
5 ) نقل تعليق خلية إلى خلية T25 زجاجة ، إضافة كمية مناسبة من وسائل الإعلام والثقافة ، يهز زجاجة الخلية بلطف حتى أن توزيع الخلايا ، وضعت في درجة حرارة الغرفة الثقافة .
6 ) في اليوم التالي لمراقبة نمو الخلايا الملتصقة ، وتغيير وسائل الإعلام الجديدة لإزالة الخلايا الميتة . الخلايا المستزرعة بشكل مستمر حتى 80-90 ٪ من خلايا ملتصقة . في العام ، الخلايا التي تم إنعاشها حديثا يجب أن تمر 2-3 مرات قبل أن يتمكنوا من إجراء التجارب اللاحقة .
مثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين 1 الأجسام المضادة
الأجسام المضادة ضد الخلايا عامل النسخ
1 - مضاد البنكرياس
ATP ملزم بروتين الأسرة 6 الأجسام المضادة
أدينوسين ثلاثي الفوسفات ملزمة كاسيت الفصيلية G1 الضد
مستقبلات الأديبونكتين 2 الأجسام المضادة
angel1 البروتين الضد
angel2 الضد
ankle2 الضد
الخصية محددة مرساة مثل البروتين 1 الأجسام المضادة
أنكرين تكرار المجال البروتين 13B الضد
مرساة تكرار المجال البروتين 20a1 الضد
مرساة تكرار المجال 20a3 الضد
مرساة تكرار المجال البروتين 22 الأجسام المضادة
مرساة تكرار المجال البروتين 50 الأجسام المضادة
bc-020 ( الإنسان خلايا سرطان الثدي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
bc-021 ( الإنسان خلايا سرطان الثدي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
bc-022 ( الإنسان خلايا سرطان الثدي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
BE ( 2 ) - ( M17 الخلايا العصبية البشرية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
BGC-803 ( الإنسان خلايا سرطان المعدة ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
C918 ( الإنسان خلايا سرطان الجلد المشيمي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
سرطان الخلايا الحرشفية اللسان البشري
هل 180 ( الإنسان خلايا غدية القولون ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
cne-2z ( الإنسان خلايا سرطان البلعوم الأنفي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
MTT اختبار كيتcolo 201 ( الإنسان خلايا غدية القولون والمستقيم ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
CW-2 ( الإنسان خلايا سرطان القولون )
أشعة القطب السالب ( الإنسان خلايا دبقي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
d283 ميد ( الإنسان خلايا نخاعي ) 5 × 106cells / زجاجة × 2
EA.HY926 ( الإنسان الوريد السري الخلايا الانصهار ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
ECV - 304 ( الإنسان الوريد السري الخلايا البطانية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
EJ ( الإنسان خلايا سرطان المثانة ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
h-97 ( الإنسان عالية النقيلي خلايا سرطان الكبد ) 5 * 106cells / زجاجة * 2
