MTS انتشار الخلايا و cytotoxicity كيت

الاسم الصيني :MTS انتشار الخلايا و cytotoxicity كيت

mts cell proliferation and cytoxicity detection كيت

مواصفات المنتج : 500 أوقات
رقم المنتج : bj-01x6321

النظام التجاري المتعدد الأطراف ( النظام التجاري المتعدد الأطراف ) هو نوع جديد من methazole مجمع ينتمي إلى tetrazole المشتقة مع MTT . النظام التجاري المتعدد الأطراف يمكن أن تتحلل الميتوكوندريا ديهيدروجيناز في المصل في الخلايا الحية ، مما أدى إلى البني الأصفر للذوبان في الماء methanolin . . . . . . .

إجراءات تشغيل خلية ثقافة :
أولا - وسائل الإعلام وشروط الحفظ بالتبريد :
1 ) إعداد متوسطة الثقافة F-12K ; مصل بقري جنيني عالي الجودة ، 10 ٪ ؛ ضعف المقاومة ، 1 ٪ .
2 ) الثقافة شرط : بخار المرحلة : الهواء ، 95 ٪ ؛ ثاني أكسيد الكربون درجة الحرارة : 37 ℃ ، الرطوبة في حاضنة 70 ٪ - 80 ٪ .
3 ) التخزين المجمد السائل : 90 ٪ مصل الدم ، 10 ٪ دمسو ، وتستخدم الآن على استعداد .
ثانيا - معالجة الخلايا :
1 ) استعادة الخلايا : تجميد أنبوب يحتوي على 1 مل من تعليق خلية وضعت بسرعة في حمام مائي في 37 درجة مئوية ( سطح الماء يجب أن يكون أقل من تجميد أنبوب غطاء ) يهز وذوبان ، انتقل إلى إعداد 15 مل أنبوب الطرد المركزي تحتوي على 4 مل متوسطة الثقافة مختلطة بالتساوي . بعد الطرد المركزي لمدة 4 دقائق في 1000 دورة في الدقيقة ، supernatants تم التخلص منها ، و 1 مل متوسطة الثقافة أضيفت إلى الخليط ثم تهب بالتساوي . كل تعليق الخلية ثم نقلها إلى زجاجة تحتوي على 5 مل متوسطة الثقافة بين عشية وضحاها . تغيير السوائل في اليوم التالي و فحص كثافة الخلية .
2 ) مرور الخلية : إذا كانت كثافة الخلية تصل إلى 80 ٪ - 90 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور الثقافة .

طرق زراعة الخلايا
1 ، مرور الخلية : كثافة الخلية يمكن أن تصل إلى 80-90 ٪ مرور
① إزالة الثقافة طاف ، وتنظيف مع برنامج تلفزيوني أو محلول فسيولوجي 1-2 مرات .
② إضافة 2 مل 0.25 ٪ ( T25 زجاجة ) ، بحيث تغطي كامل زجاجة أو طبق ، وتغطي في حاضنة الهضم ؛
③ 1-2 دقيقة في وقت لاحق ، لاحظ تحت المجهر ، إذا كان معظم الخلايا تتراجع و عدد قليل من الخلايا تسقط ، ضربة خفيفة للتأكد من حالة الهضم ، ثم إضافة * متوسطة لإنهاء عملية الهضم . إذا كانت الخلايا لا تزال عالقة ، ووضعها مرة أخرى في حاضنة ويستمر الهضم حتى أنها يمكن أن ضربة بلطف .
④ تعليق خلية الطرد المركزي لمدة 4 دقائق في حوالي 1000 دورة في الدقيقة ، وترك طاف .
بعد تعليق جديد متوسطة الثقافة ، إضافة إلى الثقافة قارورة أو طبق ، إضافة 6-8ml الثقافة المتوسطة في T25 قارورة .
تعليق الخلايا التي تم جمعها مباشرة بواسطة الطرد المركزي ، ثم تم تقسيمها إلى ثقافة جديدة زجاجة .
2 - إنعاش الخلايا :
① أنبوب المجمدة في الماء الدافئ في 37 ℃ يهز بسرعة وذوبان ، الوقت حوالي 1 دقيقة ، إضافة 4-5ml متوسطة الثقافة مختلطة بالتساوي .
② الطرد المركزي لمدة 4 دقائق في 1000 دورة في الدقيقة ، تخلى طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة ، إضافة تعليق خلية في زجاجة الثقافة ، إضافة كمية مناسبة من متوسطة الثقافة .
3 - الحفاظ على الخلايا : الحفاظ على الخلايا المجمدة عندما تنمو الخلايا في حالة جيدة
إزالة طاف ، شطف مع برنامج تلفزيوني أو محلول فسيولوجي 1-2 مرات ، إضافة 1 مل 0.25 في المائة ( T25 زجاجة )
② 1-2 دقيقة في وقت لاحق ، لاحظ المجهر أن معظم الخلايا تتراجع و عدد قليل جدا من الخلايا سقطت ، ضربة خفيفة للتأكد من حالة الهضم ، ثم إضافة * متوسطة لإنهاء عملية الهضم .
③ تعليق الخلايا في حوالي 1000 دورة في الدقيقة تم طرد لمدة 4 دقائق ، supernatants تم التخلي عنها ، و 1 مل من تجميد السائل أضيفت إلى تعليق الخلايا .
④ تجميد تخزين الأنابيب في عملية التبريد مربع ، في - 80 ℃ الثلاجة ، 4 ساعات بعد تجميد تخزين الأنابيب في خزان النيتروجين السائل التخزين .

TM3 ( الماوس خلايا لايديغ الخصية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

TSCCA ( الإنسان خلايا سرطان الخلايا الحرشفية اللسان ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

نظام التشغيل ( الإنسان خلايا عظمية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

u251 ( الإنسان خلايا دبقي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

يو 87 ملغ ( الإنسان خلايا دبقي ) 5 × 106cells / زجاجة × 2

يو 937 ( الخلايا اللمفاوية البشرية خلية الأنسجة ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

V79 ( الهامستر خلايا الرئة ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

VCAP ( خلايا سرطان البروستاتا البشرية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

فيرو ( القرد الأخضر الأفريقي خلايا الكلى ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

واي - 38 ( خلايا الرئة الجنينية البشرية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

wish ( الإنسان آمنیون الخلية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

Y1 ( Y-1 ) ( الماوس خلايا القشرة الكظرية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

yac-1 ( الماوس سرطان الغدد الليمفاوية الخلية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

ZR-75-1 ( خلايا سرطان الثدي البشرية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

ZR-75-30 ( الإنسان خلايا سرطان الثدي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

16HBE ( الشعب الهوائية البشرية epithelioid الخلايا ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

801-D ( الإنسان خلية عملاقة سرطان الرئة الخلية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

A2 ( الإنسان خلايا سرطان غداني الكيسي ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

A-427 ( الإنسان خلايا سرطان الرئة ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

A-498 ( خلايا سرطان الكلى البشرية ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

A875 ( خلايا سرطان الجلد البشري ) 5 * 106cells / زجاجة * 2

الرئة ألفا وبيتا هيدرولاز البروتين 3 الأجسام المضادة

أدينوسين ثلاثي الفوسفات ملزمة كاسيت الناقل و وحدة 3 الأجسام المضادة

أدينوسين ثلاثي الفوسفات ملزمة كاسيت الناقل وحدة 5 الأجسام المضادة بولكلونل

adck1 الضد

أسيل ملزمة البروتين المجال 4 الأجسام المضادة

ألفا وبيتا هيدرولاز 4 الأجسام المضادة

adck2 الضد

نازعة ألدهيد 16 عائلة A1 الأجسام المضادة

جزيء التصاق مفتش مثل المجال البروتين 3 الأجسام المضادة

هيدروجين الكحول 1 الأجسام المضادة

aminolevulinic حمض dehydratase الضد

التصلب الجانبي المرتبطة بروتين 4 الأجسام المضادة

macroglobulin الضد

ACCSL البروتين الضد

بروتين جنيني ألفا الضد

بروتين اميلويد السلائف ملزمة البروتين 3

نجمي أكتين الضد

الذئبة الحمامية الجهازية المرتبطة بروتين trex1 الضد

الأجسام المضادة ضد البروتين trix1 فسفرته في الذئبة الحمامية الجهازية

الأجسام المضادة فسفرته الذئبة الحمامية الجهازية المرتبطة بروتين trex1

MTS انتشار الخلايا و cytotoxicity كيتالرأس المرتبطة بروتين معقد ap-2

phosphorylated مفرق المرتبطة بروتين معقد ap-2

membraneonectin 7 الأجسام المضادة

إجراءات التشغيل
1 - 100 ميكرولتر / خلية أضيفت إلى 96 لوحة المسام ، عادة 100 ميكرولتر / خلية أضيفت إلى 2000 خلية في كل مسام في تكاثر الخلايا التجربة ، و 100 ميكرولتر / 5000-10000 الخلايا أضيفت إلى كل مسام في السمسة التجربة ( عدد الخلايا المستخدمة في كل مسام محددة ، اعتمادا على حجم الخلية ، وسرعة انتشار الخلايا بطيئة ، وهلم جرا ) . الثقافة لمدة 24 ساعة في 37 ℃ 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون خلية حاضنة .
2 . تركيز مناسب من 0 إلى 10 ميكرولتر من المركبات المضافة .
3 - 96 - فتحة لوحة احتضنت في 37 ℃ خلية حاضنة تحتوي على 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون و 100 ٪ الرطوبة .
4 - 5 × MTT المخفف في 1 × MTT الحل .
5 ، إضافة 50 μ ل 1 × MTT الحل في كل مسام ، احتضان في 37 ℃ لمدة 4 ساعات ، وجعل MTT خفض إلى ميثيل .
6 ، امتص طاف ، إضافة 150 ميكرولتر DMSO في كل حفرة حتى أن 芤芤 الذائبة ، يهز مع لوحة مسطحة شاكر .
7 ، انزيم أداة قياس في 570nm الطول الموجي للكشف عن كثافة الضوء في كل حفرة ( على سبيل المثال ، لا 570nm فلتر ، يمكنك استخدام 560-600nm فلتر ) .
8 - تحليل النتائج
a、 معدل البقاء على قيد الحياة من الخلايا : التطوير التنظيمي القيم من كل اختبار المسام طرح الخلفية التطوير التنظيمي القيم ( * متوسطة بالإضافة إلى MTT ، لا خلية ) أو فارغة المخدرات المسام التطوير التنظيمي القيم ( * متوسطة بالإضافة إلى اختبار المخدرات مع مختلف تخفيف MTT ، لا خلية ) ، التطوير التنظيمي القيم من كل تكرار المسام ± التنمية المستدامة . معدل البقاء على قيد الحياة من الخلايا هو مبين في ر / ج ٪ ، تي هو التطوير التنظيمي القيم المضافة المخدرات الخلايا ، ج هو التطوير التنظيمي القيم من السيطرة على الخلايا . معدل البقاء على قيد الحياة من الخلايا = ( إضافة التطوير التنظيمي / السيطرة على الخلايا التطوير التنظيمي ) × 100
b、 تركيز الدواء ( IC50 ) في ر / ج = 50 ٪ تركيز الدواء ( IC90 ) في ر / ج = 10 ٪ .