الكولاجين α - 15 ، col15a1 إليسا كيت

الكولاجين α - 15 ، col15a1 إليسا كيت
مقدمة
الكولاجين α - 15 ( col15a1 ) هو بروتين يشفر col15a1 الجينات . هذا الجين يشفر سلسلة ألفا من الكولاجين من النوع الخامس عشر ، وهو عضو في عائلة Facit الكولاجين ( الألياف المرتبطة بروتين الكولاجين مع انقطاع اللولب ) . الكولاجين من النوع الخامس عشر توزع على نطاق واسع في الأنسجة ، ولكن التعبير يقع في منطقة الغشاء القاعدي ، وظيفتها قد تكون تعلق على النسيج الضام السفلي الركيزة . حقوق col15a1 إليسا كيت هو ثلاث خطوات المرحلة الصلبة ساندويتش اليسا لقياس حقوق col15a1 في خلية ثقافة supernatants المصل والبلازما . طقم يحتوي على كولاي عن المؤتلف الإنسان col15a1 والأجسام المضادة ضد المؤتلف البروتين . النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام الإنسان الطبيعي col15a1 تظهر منحنى خطي بالتوازي مع منحنى القياسية التي تم الحصول عليها باستخدام المؤتلف القياسية . هذه النتائج تشير إلى أن هذه المجموعة يمكن أن تستخدم لتحديد الكتلة النسبية col15a1 في الإنسان الطبيعي .

مبدأ الكشف

مزدوجة ساندويتش الضد طريقةإليسا التكنولوجيا : التقاط الأجسام المضادة المغلفة على انزيم لوحة التسمية ، والتقاط عينة ومعيار اختبار الكائن col15a1 بعد الحضانة والتنظيف ، إضافة علامة اختبار الأجسام المضادة بعد الحضانة والتنظيف ، تشكيل " التقاط الأجسام المضادة مستضد اختبار الأجسام المضادة " المعقد المناعي ، ثم إضافة streptavidin يقترن هورس راديش پراكسيداز للحضانة ، بعد الانتهاء من الحضانة والتنظيف ، ثم إضافة TMB لون السائل ، إذا كان اختبار الكائن في العينة ، ثم وقف رد الفعل . في عملية الكشف عن المكونات الحرة تم غسلها بعيدا ، قيمة التطوير التنظيمي تم قياسها في 450nm بواسطة انزيم أداة رسم الخرائط ، وعمق اللون يتناسب طرديا مع محتوى المواد التي سيتم الكشف عنها في العينة .

نقاط التشغيل

1 . دائما تجنب فقاعات عند خلط البروتين الحل . لتجنب التلوث الصليب ، ماصة الرأس ينبغي استبدالها عند إضافة كل معيار ، عينة الكاشف . وبالإضافة إلى ذلك ، ينبغي استخدام كل كاشف على حدة في الحاوية .

2 - التأكد من أن الكواشف تضاف إلى لوحة الثقوب دون انقطاع . من أجل ضمان نتائج دقيقة ، ختم الفيلم يجب أن تكون عالقة في الحضانة خطوة .

3 . عند استخدام التلقائي آلة الغسيل ، إضافة 30 ثانية نقع فترة بعد إضافة محلول الغسيل ، أو تدوير 180 درجة بين خطوات الغسيل ، يمكن تحسين دقة القياس .

4 - المطور يجب أن تبقى عديم اللون حتى تضاف إلى المجلس . تأكد من أن المطور لا يتعرض للضوء . المطور يجب أن تتغير من عديم اللون الأزرق .

5 - إنهاء السائل يجب أن تضاف إلى لوحة في نفس النظام كما المطور . بعد إضافة إنهاء السائل ، اللون الذي يتكون في حفرة سوف تتغير من الأزرق إلى الأصفر . المسام الخضراء تشير إلى أن إنهاء الحل ليس تماما مختلطة مع الركيزة الحل .

المواد الأخرى المطلوبة

1 . enzymic الصك ، بما في ذلك تحديد الطول الموجي 450nm ، وفي الوقت نفسه ، بما في ذلك 600-680nm تصحيح الطول الموجي هو أفضل ؛

2 . ماصة بندقية رئيس ؛

3 - الماء المقطر أو منزوع الأيونات الماء ؛

4 . 100-1000 مل مقياس ;

5 . زجاجة الغسيل ، بندقية أو التلقائي لوحة microporous آلة التنظيف ؛

6 - المسار الأفقي microplate مذبذب يمكن الحفاظ على سرعة 500 ± 50 دورة في الدقيقة .

7 . أنبوب اختبار تخفيف المعايير والعينات .

الكولاجين .، ( col15a1 ) طقم إليسا البشرية
الاحتياطات

1 . إنهاء الحل المقدمة من هذه المجموعة هو محلول حامض الكبريتيك المخفف ، مع بعض التآكل ، ينبغي توخي الحذر في العملية .

2 . بعض المكونات في هذه المجموعة تحتوي على المواد الحافظة التي يمكن أن تسبب حساسية الجلد ، وينبغي ارتداء قناع لمنع استنشاق الضباب .

3 - المطور ب قد يسبب تهيج الجلد والعينين والجهاز التنفسي ، ارتداء قناع لمنع استنشاق الضباب .

4 - ارتداء القفازات الواقية ، العين والوجه المواد الواقية ، وغسل اليدين بعد العلاج .

إعداد الكواشف

1 - وضع جميع الكواشف في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة قبل الاستخدام .

2 . سائل الغسيل / مخفف التكوين : إذا كان سائل الغسيل / مخفف ( 20 × ) كريستال هطول الأمطار ، يجب أن تكون ساخنة في 37 ℃ ⾄ كريستال يذوب تماما . تمييع مع الماء المقطر 1 : 20 ( على سبيل المثال ، 1 مل تركيز محلول الغسيل إضافة 19 مل من الماء المقطر )

معيار التكوين

إزالة المعايير من عدة ، وإعداد7 أنابيب اختبار ، أولا من4 ميكروغرام / ملالمنتجات القياسية )على سبيل المثال ، 1 × تمييع 50 μ ل + 950 μ ل تركيز 200 نانوغرام / مل من 1000 μ ل تم الحصول عليها ، ثم 1 × تمييع 500 μ ل أضيفت إلى 6 أنابيب الاختبار ، على التوالي ، 200 نانوغرام / مل من مستوى المنتج تم تخفيفه إلى 6 مرات من 6 التدرجات في 6 أنابيب الاختبار ، على التوالي .200 ٪ ، 100 ٪ ، 50 ٪ ، 25 نانوغرام / مل ، 12.5 نانوغرام / مل ، 6.25 نانوغرام / مل ،من تركيز حل القياسية500 μ ل القياسية في أنبوب اختبار ، ضربة بلطف ، وهلم جرا . 1 × مخفف يستخدم تركيز صفر القياسية ( 0 نانوغرام / مل ) .

حساب النتائج

حساب متوسط حجم العينة القياسيةقيمة التطوير التنظيمي و طرح قيمة التطوير التنظيمي من ثقب فارغ مثل تصحيح القيمة . مع تركيز الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي ، منحنى قياسي من أربع معلمات المنطق وظيفة ( إزالة مجموعة فارغة في الرسم البياني ) يتم رسمها على تنسيق ورقة أو منحنى القياسية التي يتم إنشاؤها باستخدام برامج الكمبيوتر التي يمكن أن تولد أربع معلمات المنطق ( 4-p ) منحنى المناسب . إذا كان التطوير التنظيمي قيمة العينة هو أعلى من الحد الأعلى من منحنى القياسية ، ينبغي إعادة قياسها بشكل صحيح بعد تمييع .منتدى

بيانات العينة

البيانات التالية والمنحنيات للرجوع اليها فقط ، يجب على المجرب بناء منحنى القياسية وفقا لبيانات التجربة .

المنحنى القياسي المبين في هذا الرسم البياني هو فقط على سبيل المثال ، وحساب النتائج يجب أن تكون على أساس منحنى القياسية التي رسمها نفس معيار اختبار المنتج .
حساسية

بعد اختبار العينة ، حساسية الكشف عن عدة1.56ng / مل.

خصوصية

طقم اختبار لتحديد الطبيعية المؤتلف الإنسانCOL15A1منتدى

البروتينات الأخرى ذات الصلة التي أعدت في مخفف50ng/mL， عبر التفاعل تم قياسها . ولم يلاحظ أي رد فعل واضح .

ملخص الخطوات التجريبية
1 . إضافة معيار عينة ، رد فعل 1.5 ساعة في 37 ℃ تجنب الضوء ، وغسل 3 مرات .

2. بالإضافة إلى الكشف عن الأجسام المضادة ،37 ℃ لمدة ساعة واحدة ، وغسلها أربع مرات .

3. إضافة انزيم كونجوجاتيس ،في 37 ℃ لمدة 30 دقيقة ، وغسلها 4 مرات .

4 - إضافة لون السائل ، وتجنب الضوء في 37 ℃ لمدة 15 دقيقة .

5 . إضافة إنهاء السائل ، قراءة في 5 دقائق

إنسانالكولاجين .ألفا-1 الخامس عشر (COL15A1)كاشف عدة تستخدم في الكشف عن كمية الخلايا البشرية في الثقافة supernatants المصل والبلازما .COL15A1قبل استخدام هذا المنتج ، يجب أن تقرأ هذه التعليماترجلإليسا عدة لأغراض البحث العلمي فقطمنتدى