استخراج الحمض النووي وتنقية كيت

ميزة :

1.خصوصية : التمهيدي المستخدمة في جميع المنتجات التي تم تحليلها من قبل المعلوماتية الحيويةبنك جينكل التمهيدي هو التأكد من أن يكون تسلسل الجينات الخاصة جزء من جنس أو المصلي ، وبالتالي تحقيق الكشف الخاص من جنس و المصلي من البكتيريا .ممتاز منتدى

2.الاستنساخ : جميع المنتجات في هذه السلسلة تم التحقق منها من قبل عدد كبير من السلالات .ممتاز منتدى

3.الحساسية : هذه السلسلة من المنتجات يمكن أن ندرك حساسية عالية للكشف عن البكتيريا .103cfu / ملفائدة نموذج يمكن تحقيق الكشف المباشر دون تعقيد عملية زيادة البكتيريا .

4.فائدة نموذج يحتوي على مزايا الكشف عن مجموعة واسعة ، وتغطي الضرر الجسيم على جسم الإنسان .17الكشف السريع عن العينات السريرية وغيرها من العينات البيئية يمكن أن تتحقق .3-4ساعة .

5.هيمنة1: تسلسل الموارد الغنية ، ما عدابنك جينوبالإضافة إلى ذلك ، فإن الشركة أيضا فك عدد كبير من السلالات ، والتي يمكن أن تضمن اختيار الاشعال المحافظة وخصوصية .

6.هيمنة2هذه السلسلة من مجموعات تم التحقق منها من قبل عدد كبير من المحافظة و خصوصية التجربة ، مع وفرة الموارد البكتيرية ، كل مجموعة تم اختبارها20المحافظة والتحقق من صحة أكثر من معيار السريرية سلالات40من أجل ضمان عدم وجود نتائج إيجابية كاذبة أو سلبية كاذبة التقرير أثناء الاستخدام .

استخراج الحمض النووي الريبي والحمض النووي :

تكسير : تكسير الصيغة قد يكون بسبب ما تريد استخراج الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي يختلف ، ولكن الشيء المشترك هو تقسيم العازلة التي تحتوي على تركيزات عالية من الملح .

chaotropes : chaotrope يدمر الروابط الهيدروجينية و التفاعلات مسعور . الأملاح السائلة تشمل الجوانيدين هيدروكلوريد ، الجوانيدين ثيوسيانات ، واليوريا ، بيركلورات الليثيوم .

المنظفات : بالإضافة إلى وكيل الافراج ، وعادة ما يكون هناك بعض المنظفات في تكسير العازلة للمساعدة في حل و تكسير البروتين .

溶يونيوالانزيم البروتيني ك : اعتمادا على نوع العينة ، ويمكن أيضا استخدام انزيم الانقسام . البروتيني ك هو واحد منهم ، ولكن في الواقع يعمل بشكل جيد في هذه تبديل طبيعة العازلة . عندما البروتين لمسخ زيادة دور البروتيني ك سوف تتعزز تبعا لذلك . ومع ذلك ، حليونيوالانزيمات لا تعمل في لمسخ ، وبالتالي حليونيوانزيم العلاج عادة ما تتم قبل إضافة تعديل الملح .

خطوات الاستخراج :

1 . أخذ العينات من الثلاجة السلبية 80 ووضعها على الجليد ببطء مذاب . ( قبل التبريد الطرد المركزي إلى 4 درجة )

بعد ذوبان الجليد ( الأحمر ) ، 200 ميكرولتر من الكلوروفورم ( 1 / 5 من حجم تريزول ) أضيفت إلى الجليد ، ارتجاج عنيف ( أبيض أحمر حليبي ) لمدة 10 دقائق . الكلوروفورم هو مذيب عضوي فعال في فصل المرحلة العضوية وغير العضوية المرحلة . المرحلة العضوية أساسا الفينول والبروتين ملزمة ، مما يجعل من البروتين والجيش الملكي النيبالي منفصلة ، والجيش الملكي النيبالي في المرحلة المائية . و

3 - في precooling الطرد المركزي ، الطرد المركزي ( 4 درجة ، 12 ، 000 دورة في الدقيقة ، 15 دقيقة ) بعد الطرد المركزي ، يمكن أن ينظر إليه بوضوح في ثلاث طبقات ( الطبقة العليا من عديم اللون وشفافة المرحلة المائية هي طبقة الحمض النووي الريبي ، وسط طبقة رقيقة من الحليب الأبيض هو الحمض النووي طبقة ، الطبقة السفلى هي طبقة البروتين الأحمر ) .

4 . بعناية استيعاب طاف ببطء ، حوالي 400 ميكرولتر ( يفضل أن يكون أقل من ذلك بكثير ) ، وضعت في آخر 1.5 مل ريبونوكلياز الجيش الشعبي مجانا أنبوب ، إضافة isovolume الكحول الآيزوبروبيل ، وخلط جيدا رأسا على عقب ، وضعت في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة .

5 . الطرد المركزي ( 4 درجة ، 12 ، 000 دورة في الدقيقة ، 15 دقيقة ) ، مرئية بيضاء هطول ( في بعض الأحيان أقل من الخلايا لا يمكن أن نرى هطول الأمطار ، يمكن وضعها في 20 أو 82 ساعة سلبية قبل الاستمرار في الخطوة التالية )

6 . تخلص من طاف ، إضافة 950 ul 75 ٪ إيثانول في كل أنبوب ، مزيج رأسا على عقب ( تأكد من عدم استخدام بندقية ضربة مزيج ، وهذا سوف يؤدي إلى حل الحمض النووي الريبي ) .

7 . الطرد المركزي ( 4 درجة ، 12 ، 000 دورة في الدقيقة ، 10 دقيقة ) ، يمكن أن ينظر إليه في الجزء السفلي من الأبيض الواضح هطول .

8 - بعد الطرد المركزي ، تخلى عن طاف ، وضعت في الطرد المركزي مرة أخرى على الفور ، مع 10

9 - إضافة كمية مناسبة من الماء حسب حجم depc هطول الأمطار ( عادة 20 ~ 30 μ ل ، في بعض الأحيان لا يمكن أن نرى هطول الأمطار ، يمكن إضافة 10 μ ل depc المياه الذائبة ) ، ضربة الحمض النووي الريبي الذائبة ، الطابق الحادي عشر انزيم أداة رسم الخرائط لقياس التركيز ، التطوير التنظيمي ( 260 / 280 = 1.8-2.0 ) علامة سلبية 80 التخزين .

استخراج العدلاتالحمض النووي الريبي يوحي بأن عدد الخلايا أكبر من 2x106 / عينة ;

ملاحظةارتداء قناع أثناء العملية .

تصميم التمهيدي يجب أن تتبع المبادئ التالية :
طول الاشعال : 15-30 بي بي ، وعادة حوالي 20 بي بي .
② التمهيدي التضخيم تمتد : 200-500bp مناسبة ، في ظل ظروف معينة يمكن أن تمتد إلى 10 كيلوبايت من شظايا .
③ التمهيدي قاعدة : ز + ج محتوى 40-60 ٪ ، ز + ج قليل جدا من التضخيم تأثير الفقراء ، ز + ج الكثير من السهل أن تظهر غير محددة باند . atgc جيدة التوزيع العشوائي ، وتجنب أكثر من 5 البيورين أو بيريميدين النوكليوتيدات في سلسلة .
تجنب البنية الثانوية في التمهيدي ، وتجنب التكامل بين اثنين من التمهيدي ، ولا سيما 3 ' نهاية التكامل ، وإلا سوف تشكل التمهيدي ديمر ، غير محددة التضخيم باند .
قاعدة 3 ' نهاية التمهيدي ، ولا سيما محطة قاعدة قاعدة قاعدة متبادلة ، ينبغي أن تكون مطابقة بدقة لتجنب فشل الاسترداد بسبب عدم تطابق قاعدة المحطة الطرفية .
هناك أو يمكن أن تضاف إلى موقع مناسب في التمهيدي ، تضخيم تسلسل الهدف قد قطع موقع مناسب ، والتي هي مفيدة جدا في تحليل أو استنساخ جزيئي .
خصوصية الاشعال : الاشعال لا ينبغي أن تكون متشابهة مع غيرها من تسلسل الحمض النووي تسلسل قاعدة البيانات .

ملاحظةس

1 . إزالة عدة من البيئة المبردة يجب أن تكون متوازنة في درجة حرارة الغرفة لمدة 15-30 دقيقة قبل استخدامها ، إذا كان الانزيم هو حزمة مفتوحة بعد لوحة ، لوحة يجب أن تكون معبأة في حقيبة مختومة للحفاظ عليها . تركيز محلول الغسيل قد تبلور هطول الأمطار ، تمييع في حمام الماء يمكن أن تكون ساخنة للمساعدة في حل ، والغسيل لا تؤثر على النتائج .

2 - ينبغي استخدام العينات في كل خطوة ، ودقة ينبغي أن يكون دائما تصحيح لتجنب الخطأ في الاختبار . عينة واحدة إضافة الوقت ينبغي أن تسيطر عليها في غضون 5 دقائق ، إذا كان عدد كبير من العينات ، فمن المستحسن استخدام بندقية بالإضافة إلى عينة .

3 . يرجى القيام منحنى القياسية في وقت واحد في كل قياس，جعل ثقب مزدوج . إذا كان محتوى المادة في عينة عالية جداقيمة التطوير التنظيمي هو أكبر من قيمة التطوير التنظيمي في حفرة دي ، يرجى استخدام عينة مخفف تمييع عدة مرات ( ن ) قبل تحديدمرة أخرىمضروبا في مجموع تخفيف مضاعف )×n×5).

4 . ختم الفيلم يقتصر على استخدام لمرة واحدة لتجنب التلوث الصليب .

5 - الحفاظ على الركيزة من الضوء .

6 - تعمل بدقة وفقا للتعليمات ، نتائج الاختبار يجب أن يكون الحكم على أساس قراءة الأنزيمية الصك .

7 - جميع العينات ، سوائل الغسيل ، وجميع أنواع النفايات يجب أن تعامل على أنها معدية .

8 - لا يمكن أن تكون مختلطة مع مختلف مكونات كاشف الكثير .

9 - لا يمكن استخدام المنتجات التي عفا عليها الزمن .

10 - إذا كان هناك أي اختلاف مع اللغة الإنجليزية دليل ، دليل اللغة الإنجليزية يجب أن تسود .