نوعية عينة الخلية مباشرة على موثوقية والتكرار من النتائج التجريبية . هذا النظام سوف أعرض لكم النقاط الرئيسية في إعداد والحفاظ على عينات من الخلايا ، وتوفير مرجعية موحدة للباحثين ، وضمان الحفاظ على عينات من الخلايا في معظم جيا الدولة والحفاظ على الخصائص البيولوجية و القيمة التجريبية .
الخطوات الرئيسية في إعداد عينة الخلية
1 - التحضير المسبق
- تصميم التجارب بشكل واضح : تحديد خطة الإعداد وفقا لأهداف التجارب اللاحقة ( على سبيل المثال ، البروتيوميات ، transcriptomics ، خلية ثقافة ، الخ . )
- إعداد الكواشف والمواد الاستهلاكية : جميع الكواشف والمواد الاستهلاكية التي تأتي في اتصال مع الخلايا يجب أن تكون معقمة وخالية من التلوث nuclease / البروتيني
- ما قبل التبريد للمعدات : ما قبل التبريد إلى درجة حرارة مناسبة للدوران المركزي ، وأنابيب التخزين المجمد ، إلخ .
2 - جمع ومعالجة الخلايا
- التحقق من حالة الخلية : التأكد من أن الخلية في مرحلة النمو لوغاريتمي ، ومعدل الخلايا الحية > 95 ٪
- علاج لطيف : تجنب ضربة عنيفة ، وتنظيف مع برنامج تلفزيوني أو محلول ملحي قبل التبريد
- العلاج في الوقت المناسب : إزالة من حاضنة في أقرب وقت ممكن بعد العلاج ، والحد من استجابة الإجهاد الخلوي
3 - متطلبات المعالجة الخاصة
- تحليل البروتين عينة : إضافة مزيج من مثبطات الأنزيم البروتيني ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان
- عينة تحليل الحمض النووي : استخدام المواد الاستهلاكية غير RNASE / DNASE ، إضافة الحمض النووي الريبي حامي
- عينات metabonomics : التبريد السريع للأنشطة الأيضية باستخدام الميثانول أو التبريد قبل التبريد الخاص السائل
طريقة اختيار خلية الحفظ
1 . الحفاظ على المدى القصير ( < 24 ساعة )
- 4 ℃ التخزين : تعليق في وسائل الإعلام أو العازلة كوان كاملة
- التطبيق : التجارب التي أجريت في اليوم نفسه مثل قياس التدفق الخلوي ، والتصوير الخلوي الحية
- الاحتياطات : تجنب التلوث الجرثومي ، والحفاظ على الختم
2 - الحفاظ على المدى المتوسط ( 1 أسبوع إلى شهر )
- 80 ℃ التخزين : إضافة مناسبة التجمد وكيل واقية
- التوصية بالتبريد :
- خلية ثقافة : مصل بقري جنيني يحتوي على 10 ٪ دمسو
- تحليل البروتين : ليزات تحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني
- تحليل الحمض النووي : الحمض النووي الريبي حماية الكواشف ( مثل تريزول أو سوائل التخزين الخاصة )
3 . الحفاظ على المدى الطويل ( > شهر واحد )
- الحفاظ على النيتروجين السائل ( - 196 ℃ ) : الطريقة الأكثر فعالية للحفاظ على نشاط الخلايا جيا
- إجراءات التجميد :
س
1 - برنامج التبريد : 4 ℃ 30 دقيقة → - 20 ℃ 2 ساعة → - 80 ℃ بين عشية وضحاها
2 - نقل النيتروجين السائل المرحلة ( 150 ℃ ) لفترة طويلة .
س
- خيارات الحفظ بالتبريد : وضع علامات على معلومات الخلية ، وتاريخ الحفظ بالتبريد ، وعدد المرات التي تمر بها الأجيال ، والمشغل
النقاط الرئيسية لمراقبة الجودة
1 - الكشف عن نشاط الخلايا
- اختبار التريبان الأزرق أو MTT قبل وبعد التجميد
- ينبغي أن يكون النشاط الخلوي بعد الإنعاش > 80 ٪ ( حالة مثالية > 90 ٪ )
2 - مكافحة التلوث
- الكشف الدوري عن تلوث الميكوبلازما
- المراقبة البصرية والفحص المجهري للتلوث البكتيري والفطري
- تحديد الخلايا الملوثة عبر شارع
3 - وضع العلامات والسجلات
- نظام إدارة رمز ثنائي الأبعاد أو الباركود
- تسجيل مفصل لمصدر الخلية ، وعملية المعالجة ، وموقع الحفظ
رابعاً - حلول المشاكل المشتركة
| المشاكل | الأسباب المحتملة | الحلول |
| انخفاض نشاط الخلايا بعد الإنعاش | التبريد السريع أثناء الحفظ بالتبريد | استخدام مربع برنامج التبريد |
| تدهور البروتين | نقص مثبطات الأنزيم البروتيني | إضافة مزيج من مثبطات الأنزيم البروتيني متعددة |
| تدهور الحمض النووي الريبي | تلوث ريبونوكلياز أثناء التشغيل | استخدام المواد الاستهلاكية دون ريبونوكلياز ، والتعامل السريع |
| تلوث الميكوبلازما | تلوث الخلايا الأولية أو العمليات | الكشف المنتظم باستخدام زبال الميكوبلازما |
خامسا - اعتبارات السلامة
1 - السلامة البيولوجية : الامتثال لمتطلبات السلامة البيولوجية الصف حسب مصدر الخلية
2 . النيتروجين السائل العملية : ارتداء قناع واقية وقفازات لمنع الصقيع
3 . السلامة الكيميائية : DMSO والكواشف الأخرى التعامل معها بشكل صحيح ، وتجنب الاتصال المباشر مع الجلد
4 - معالجة النفايات : النفايات الخلوية وفقا لتدفق معالجة المواد الخطرة بيولوجيا
سادساً - موجز برامج الحفظ الموصى بها
تطبيق الاتجاه | يوصي طريقة الحفظ | حفظ درجة الحرارة | توقع وقت الحفظ |
| خلية ثقافة الإنعاش | DMSO + المصل بالتبريد | النيتروجين السائل | أكثر من 10 سنوات |
| لطخة غربية | ريبا | - 80 ℃ | 1 سنة |
استخراج الحمض النووي الريبي | تريزول أو الحمض النووي الريبي حامي | - 80 ℃ | 6 أشهر |
metabonomics | 80 ٪ الميثانول التبريد | - 80 ℃ | 3 أشهر |
قياس التدفق الخلوي | برنامج تلفزيوني | 2 ٪ FBS | 4 ℃ | 24 ساعة |
نظام إدارة ذكي
يوصي المختبر بإنشاء نظام إلكتروني لإدارة عينات الخلايا يحتوي على :
- تتبع موقع العينة في الوقت الحقيقي
- التحديث التلقائي لسجلات التخزين البارد / إزالة
- فحص المخزون الدوري والتذكير
- البحث السريع عن معلومات العينة

عالية الجودة عينات من الخلايا هي حجر الزاوية في نجاح التجربة . من خلال توحيد عملية إعداد وحفظ الأسلوب العلمي ، السلامة البيولوجية من عينة الخلية يمكن أن تبقى إلى أقصى حد . جنبا إلى جنب مع تطوير تقنيات جديدة مثل تحليل خلية واحدة ، والفضاء transcriptomics ، متطلبات جودة عينة الخلية سوف تتحسن . وضع معايير صارمة لإدارة العينات ليس فقط الحاجة إلى ضمان موثوقية التجارب الحالية ، ولكن أيضا الاستثمار الاستراتيجي في الحفاظ على قيمة الموارد البيولوجية للبحوث المستقبلية .