عادة يمكننا استخدامإليساهناك أنواع مختلفة من عينات الاختبار ، مثل مصل الدم ، البلازما ، البول ، خلية ثقافة supernatants أو تجانس الأنسجة المصلي . تجهيز العينات بشكل صحيح هو ضمانإليسااختبار دقة ودقة * الخطوات ، وفيما يلي وصف موجز لأنواع مختلفة من عينات من أساليب المعالجة .

1、 مصل

المصل يستخدم عادة من قبل زويإليساالكشف عن عينة ، وتجهيز بسيطة نسبيا .

عينات الدم التي تم جمعها من أنبوب اختبار أو أنبوب الطرد المركزي دون پايروجن أو الذيفان الداخلي .2ساعة أو4في ℃ بين عشية وضحاها ، مما يجعل المصل عجل . وضع أنبوب اختبار أو أنبوب الطرد المركزي بشكل غير مباشر ، مما يزيد من مستوى السائل عبر الباب ، يمكن أن يؤدي إلى مزيد من التساقط من المصل .4℃1000سgطرد مركزي20دقيقة، وجمع بعناية طاف . أقترح أن تكون معبأة في عدة نسخ من المصل .-20أو-80الحفاظ على درجة مئوية ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

انحلال الدم ينبغي تجنبها أثناء أخذ عينات من الدم ، لأن المواد مع نشاط البيروكسيديزبرنامج HRPعلامةإليساالكشف عن لون غير محدد ، مما يؤدي إلى عدم دقة الكشف . وفي الوقت نفسه ، ينبغي تجنب التلوث الجرثومي ، لأن البكتيريا قد تحتوي علىبرنامج HRPمما يؤدي إلى إيجابية كاذبة من الاختبار .

2、 البلازما

عينات الدم التي تم جمعها من الأوعية الدموية أو أنابيب الطرد المركزي التي تحتوي على مضادات التخثر .30 دقيقةداخل .4℃ 1000سgطرد مركزي15 دقيقةsupernatants البلازما . تقسيم واضح في عدة نسخ ،-20أو-80الحفاظ على درجة مئوية ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان . تجنب استخدام عينات الدم أو الدهون .

مضادات التخثر الشائعةEDTAالهيبارين ، سيترات الصوديوم ، وما إلى ذلك ، يجب أن تقرأ بعناية عند اختبار عدة تعليمات ، والتحقق من ما إذا كانت مجموعات لديها متطلبات خاصة للتخثر .

3、 خلية ثقافة طاف

الخلايا المستزرعة طاف في أنبوب الطرد المركزي ،1000سgطرد مركزي20 دقيقة، إزالة الحطام الخلوية والشوائب ، وإزالة طاف ،-20أو-80الحفاظ على درجة مئوية ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

4、 خلية ليزات

1و امتصاص الثقافة المتوسطة في الثقافة لوحة ، هضم الخلايا مع التربسين ، إضافة كمية مناسبة من الثقافة المتوسطة تهب الخلايا من الثقافة لوحة . تعليق الخلايا يمكن حذفها .

2و جمع تعليق خلية ،1000سgطرد مركزي10 دقايق، التخلص من وسائل الإعلام ، وذلك باستخدام precoolingPBSغسل3مرة .

3و إضافة كمية مناسبة من precoolingPBSأو خلية ليزات ( إضافة مثبطات الأنزيم البروتيني قبل الاستخدام المؤقت ) تعليق الخلايا . عادة6كمية الخلايا المطلوبة في فتحة واحدة150-250ميكرولتر PBSتعليق الثقيلة .

4و وضع العينة في-20أو-80تجميد العينة ، ثم إذابة العينة في درجة حرارة الغرفة ، مرارا وتكرارا تجميد وذوبان عدة مرات ، حتى أن الخلايا تماما متصدع . عينة يمكن أيضا أن تكون مكسورة بواسطة الموجات فوق الصوتية من أجل تحقيق الغرض من تكسير .

5و 4℃10000 × زطرد مركزي10 دقايق، إزالة شظايا الخلية ، وإزالة طاف ،-20أو-80الحفاظ على درجة مئوية ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

5نسيج متجانس الطين

1و عينة الأنسجةPBS (0.01)M، PH 7.4وشطف أو غسل الدم أو الشوائب المتبقية على سطح الأنسجة .

2و وزن الأنسجة كتلة ، قطع بعد التسجيل ، ينبغي أن تكون صغيرة قدر الإمكان ، من أجل تيسير التجانس أكثر اكتمالا

3و إضافة الأنسجة في نسبة معينة من precoolingPBS( إضافة مثبطات الأنزيم البروتيني قبل الاستخدام ) خليط يوضع على الجليد أو في حمام الثلج . ( عادة حسب وزن المنظمة :PBSحجم1 : 9نسبة التجانس ، على سبيل المثال1 غرامعينة الأنسجة المراسلات9 ملالPBSحجم معين يمكن تعديلها بشكل صحيح وفقا للاحتياجات التجريبية ، بعد الكشف عن حساب تركيز العينة يجب أن تكون مضروبة في تخفيف نسبة المقابلة )

4و شفط الطين موحدة في أنبوب الطرد المركزي ،4℃5000 × زطرد مركزي5 ~ 10 دقيقةإزالة-20أو-80الحفاظ على درجة مئوية ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان .

6、 عينات بيولوجية من البول واللعاب وغيرها من السوائل

1000 × جطرد مركزي20 دقيقةإزالة يمكن الكشف عنها .

عموما ، لأنإليسامحتوى بروتين قابل للذوبان فقط يمكن الكشف عنها ، لذلك يجب التأكد من أن جميع العينات هي توضيح السائل ، والرواسب أو تعليق يجب إزالتها بالطرد المركزي .

من أجل ضمان دقة الكشف عن-20أو-80عينة1-6الكشف في غضون شهر .4يجب أن تكون العينات المحفوظة في1اختبار في غضون أسبوع .

وبالإضافة إلى ذلك ، ينبغي أيضا التأكد من أن العينة لا تحتوي علىNaN₃لأنNaN₃سوف تمنعبرنامج HRPالنشاط ، مما يؤدي إلى نتائج سلبية كاذبة .