عند زراعة الخلايا البشرية perivasculature الاوعية الدموية الدقيقة ، واختيار وسائل الإعلام تفاصيل العملية تؤثر بشكل مباشر على حالة نمو الخلايا وموثوقية النتائج التجريبية . وفيما يلي بيان تكميلي بعدة اعتبارات رئيسية :

1 - نوعية المصل دفعة الاستقرار

إذا كان المصل يحتوي على وسائل الإعلام ( على سبيل المثال ، dmem 10 ٪ سلاح ) المستخدمة ، فمن الضروري للتأكد من أن المصل هو مصدر موثوق بها ، وتجنب الميكوبلازما الذيفان الداخلي أو التلوث . المصل من دفعات مختلفة قد تكون مختلفة من عوامل النمو ، لذلك فمن المستحسن أن يكون اختبار دفعة أو اختيار المصل خالية من وسائل الإعلام للحد من المتغيرات .

2 - استراتيجيات تكملة عوامل النمو

خلايا pericyte حساسة PDGF - BB ، bFGF وغيرها من عوامل النمو ، ولكن التركيز المفرط قد يؤدي إلى انتشار أو تمايز الهجرة . ويقترح أن أفضل إضافة نسبة ينبغي أن تحدد من خلال التجارب الأولية ، طازجة متوسطة ينبغي استبدالها بشكل دوري ( مناسبة كل 2-3 أيام ) .

3 - تنظيم التوتر الأكسجين

perivascular الخلايا في الجسم الحي في نقص الأكسجة المكروية ( 1-5 في المائة o ₂ ) الثقافة التقليدية مربع ( 21 في المائة o ₂ ) قد يؤدي إلى الإجهاد التأكسدي . يمكن النظر في استخدام حاضنة ثلاثية لمحاكاة حالة فسيولوجية الأكسجين أو إضافة مضادات الأكسدة للتخفيف من hyperoxia الضرر .

4 - تحسين طلاء الركيزة

التصاق الخلايا تعتمد على البروتينات المصفوفة ، الكولاجين الرابع أو fibronectin يوصى المغلفة في طبق بتري ، ولكن ينبغي إيلاء الاهتمام إلى تركيز ( عادة 5-10 ميكروغرام / سم ² ) . overencapsulated قد تغير خصائص الهجرة الخلية .

5 - الوقاية من مخاطر التلوث ومكافحته

الخلايا الليفية هي عرضة للتلوث ، نقاء يمكن تحديدها من قبل cd146 المناعي أو NG2 تلطيخ . إذا كان التلوث هو العثور على ، يمكن أن يكون تنقية من قبل الفرق في طريقة الالتصاق أو التدفق .

6 - صقل عمليات المرور

انخفاض تركيز ( 0.05 في المائة ) جنبا إلى جنب مع فترة قصيرة من الحضانة ( 2-3 دقائق ) ينبغي أن تستخدم في الهضم و تحييد متوسطة تحتوي على المصل في الوقت المناسب . نسبة مرور 1 : 2 إلى 1 : 3 ، وتجنب الشيخوخة الناجمة عن انخفاض كثافة الخلايا في مرور واحد .

7 - الاحتياطات المتعلقة بالتبريد والإنعاش

تخزين السائل يجب أن تحتوي على 10 ٪ DMSO وارتفاع تركيز المصل ( على سبيل المثال ، 90 ٪ FBS ) ، النيتروجين السائل بعد التبريد الداخلي . استبدال السائل يجب أن تكتمل في غضون 24 ساعة بعد الإنعاش لإزالة بقايا دمسو .

من خلال التحكم في التفاصيل المذكورة أعلاه ، يمكن أن تحسن بشكل كبير من دقة بيانات الدراسة الفنية والتكرار pericyte الثقافة . التجارب اللاحقة ، مثل شارك في الثقافة أو بناء نموذج الأوعية الدموية ، اقترح الكشف عن علامات مثل α - سما و desmin في وقت واحد للتأكد من استقرار الخلايا المظهري .